人剪切修复基因着色性干皮病基因d 对人脐静脉 - 中国动脉硬化杂志.pdf

CN43鄄1262/ R摇 中国动脉硬化杂志2012年第20卷第5期 445 [文章编号]摇 1007鄄3949(2012)20鄄05鄄0445鄄06 ·实验研究 · 人剪切修复基因着色性干皮病基因D对 人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用 张 南,李菊香,丁浩,洪 葵,吴清华,程晓曙 (南昌大学第二附属医院心内科 江西省分子医学重点实验室,江西省南昌市330006) [关键词]摇 剪切修复基因XPD;摇 人脐静脉内皮细胞;摇 细胞凋亡 [摘摇 要]摇 目的摇 探讨人剪切修复基因着色性干皮病基因D(XPD)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促凋亡作 用。 方法摇 用脂质体转染法瞬时转染HUVEC,转染重组质粒pEGFP鄄N2/ XPD和空载质粒pEGFP鄄N2,并用未转染 的与重组质粒pEGFP鄄N2/ XPD和空载质粒pEGFP鄄N2具有相同遗传背景和代数的HUVEC作为空白对照。 实验分 为3组:正常对照组、pEGFP鄄N2组和pEGFP鄄N2/ XPD组。 用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况,用 流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用RT鄄PCR和Western Blot检测XPD、Bcl鄄2、Bax和wt鄄p53表达量的变化,用MTT 法 观察细胞增殖活力。 结果摇 在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP鄄N2/ XPD或空载质粒pEGFP鄄N2 的细胞 中观察到绿色荧光,即转染成功;流式细胞仪结果显示,重组质粒pEGFP鄄N2/ XPD 的转染引起细胞凋亡增加(P 0郾05或P0郾01);RT鄄PCR和Western Blot检测发现,重组质粒pEGFP鄄N2/ XPD 的转染使得 XPD表达增高(P 0郾05),同时使得Bcl鄄2表达降低,Bax和wt鄄p53表达增高(P 0郾05或P 0郾01);MTT 结果显示,重组质粒pEGFP鄄 N2/ XPD的转染抑制细胞增殖活力(P0郾05)。 结论摇 XPD能促进HUVEC凋亡,下调XPD的表达,有望成为治疗 动脉粥样硬化的一个新靶点。 [中图分类号]摇 R363 [文献标识码]摇 A The Promoting Effects of Xeroderma Pigmentosum D Gene on Proliferation of Hu鄄 man Umbilical Vein Endothelia Cells ZHANG Nan,LIJu鄄Xiang,DING Hao,HONG Kui,WU Qing鄄Hua,and CHENGXiao鄄Shu (Department of Cardiology,the Second Affiliated Hospital of Nanchang University Jiangxi Provincial Key Laboratory of MolecularMedicine,Nanchang,Jiangxi330006,China) [KEY WORDS]摇 Xeroderma Pigmentosum D;摇 Human Umbilical Vein Endothelial Cell;摇 Cell Apoptosis [ABSTRACT]摇 摇 Aim摇 To investigate pro鄄apoptosis effects of xeroderma pigmentosum D(XPD) gene on human um鄄 bilical vein endothelia cells (HUVEC).摇 摇 Methods摇 Recombinant plasmid pEGFP鄄N2/ XPD and vacant vector plasmid pEGFP鄄N2 weretransienttransfectedinto HUVECby liposome2000 method,withth