还原型谷胱甘肽对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织脂质过氧化保护作用.docVIP

还原型谷胱甘肽对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织脂质过氧化保护作用［摘 要］ 目的 探讨还原型谷胱甘肽（GSH）对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺组织脂质过氧化的影响。 方法 雄性Wistar大鼠130只,随机分成正常对照组(C组,n=30)、急性胰腺炎组(A组,n=50)和还原型谷胱甘肽干预组(G组,n=50)。于6、12、24、36、48 h分批处死大鼠,观察大鼠胰腺组织MDA水平及胰腺病理变化。 结果 G组各时点MDA水平均较A组明显降低(P0.05),G组各时点的胰腺病理改变较A组的明显减轻(P0.05)。 结论 还原型谷胱甘肽可降低胰腺组织MAD水平,减轻了实验性ANP大鼠的胰腺损害,对胰腺组织有保护作用。 ［关键词］ 还原型谷胱甘肽；急性坏死性胰腺炎；脂质过氧化? ［中图分类号］ R576.1［文献标识码］ A［文章编号］ 1672-4208(2008)01-0031-02 近年来，急性出血坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis, ANP)成为消化内科较常见的危重病,病死率高。研究表明，脂质过氧化在急性胰腺炎的发病过程中起着较重要的作用。本研究采用牛黄胆酸钠胆胰管逆行推注诱导大鼠ANP模型,观察大鼠胰腺组织MDA和组织学病理改变及还原型谷胱甘肽对ANP模型的影响。 1 材料与方法 1.1 主要试剂 还原型谷胱甘肽（绿汀诺）购自山东省绿叶制药有限公司，牛磺胆酸钠为Sigma公司产品， MDA检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 1.2 实验方法 1.2.1 动物分组及模型制作 健康雄性Wistar大鼠130只鼠龄2～3月,体重250～270 g(山东大学实验动物中心提供)。随机分成3组:假手术组(C组,30只),急性胰腺炎组(A组,50只),GSH组(G组,50只)。所有大鼠实验前均禁食16小时,自由饮水。A组大鼠用3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉,无菌条件下腹壁正中切口入腹,于胆管出肝门端用无损伤血管钳暂阻断胆总管,用5×5号钝针沿十二指肠对系膜缘刺入,并逆行插入胰胆管0.5 cm妥善固定,用5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管(1 ml#8226;kg?-1#8226;min?-1),拔管,以8-0无损伤缝线修补十二指肠穿孔,关腹，术后立即背部皮下注射糖盐水2 ml/g以补充液体量。C组仅做剖腹术并轻轻翻动胰腺。G组按照A组同法诱导ANP模型同时腹腔内注射3 mg/ml的GSH氯化钠溶液0.04 mg/g。各组实验大鼠6、12、24、36、48 h(共5个时点)分批处死。C组每个时点处死6只大鼠,A组和G组每个时点处死10只大鼠。 1.2.2 胰腺 MDA的测定 实验时解剖大鼠，分离胰腺,吸干水分,剪碎后加入PBS溶液至2 ml,匀浆机制成10%的胰腺组织匀浆,4℃低温离心5000 r/min,15分钟,取上清-20℃冰箱保存待测。按试剂盒方法操作用硫代巴比妥酸比色法测定MDA。 1.2.3 胰腺组织病理检测 取胰腺用福尔马林溶液固定、石蜡包埋、切片后HE染色，光镜下由病理科医师观察病理改变，胰腺损伤参考Kyogoku法[1]进行评估。 1.2.4 统计方法 应用S-PLUS6.2版统计软件进行数据处理。计量资料数据以±s表示,行单因素方差分析,P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 GSH对大鼠胰腺组织MDA影响 各组大鼠各时点胰腺组织MDA水平见表1。结果表明,经GSH预处理后胰腺组织MDA水平显著下降。 2.2 大鼠胰腺组织病理改变评价 术后6小时开始分批处死大鼠,开腹后C组见少量澄清腹水,A组、G组可均见血性腹水,G组腹水量较A组略少。随处死时间延长A组、G组胰腺均可见弥漫性紫黑色斑片区,胰腺轮廓不清，胰体肿胀,浆膜下可见出血斑,胰周可见皂化斑形成。 2.3 镜下评分结果 见表2。 　 3 讨论? Wisner等[2]在雨蛙素诱导的鼠急性胰腺炎模型中发现,氧自由基、过氧化物在AP发病中起重要作用。在目前AP发病发病机制尚不明确下自由基的释放和清除机制的紊乱可能与AP的发病以及发展进程有关[3]。活性氧的大量产生引起的细胞膜脂质过氧化而致细胞毒效应，是机体致细胞损伤的分子机制中的重要一环[4]。脂质过氧化损伤可引起损伤产物MDA的升高，因此测定MDA能较好地反映脂质过氧化水平。? 本实验中A组、G组经牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管后诱导ANP模型中MDA水平及胰腺病理评分显著升高表明脂质过氧化在胰腺损伤中有重要作用。G组大鼠各时点胰腺组织MDA水平均明显低于A组,G组胰腺病理损害程度也明显比A组的轻,说明还原型谷胱甘肽(绿汀诺)对大鼠胰腺组织起治疗保