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刺参器官再生的组织学及相关基因研究
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刺参器官再生的组织学与相关基因的研究
刺参器官再生的组织学与相关基因研究
摘 要
器官和组织的形成是发育生物学中没有解决的神秘的问题。一个器官的形成
已经证实很难去解剖,部分是因为这个过程非常连续而且复杂,同时也是因为大
部分器官是在胚胎期发育,而这些过程是相互联系的,所有的这些使得研究一个
特异的过程非常难。器官再生在成年动物当中也可能发生,尽管范围非常有限,
包括丢失的器官的再生。一旦此过程发生,这个过程就可能从空间上分离开来,
并且这个暂时的发育事件就可以作为器官生成的一个系统模式来研究。成年动物
的器官再生的一个最显著的事件就是海参纲成员在吐脏后能够再生出多种器官。
刺参能够在吐脏后迅速再生出其身体器官。新的消化道的发育是一个复杂的过
程,包括基因表达的改变,从而导致了有关再生的细胞结构,免疫防御,细胞信
号转导等方面的改变.
我们将刺参作为一个模型系统利用组织学及现代分子生物学技术来研究刺
方法对刺参吐脏和再生进行了观察,结果显示刺参吐脏后便开始再生,吐脏后的
第2天可观察到呼吸树主干及分支结构.腹部肠系膜在吐脏后逐渐增厚,第5
天可观察到肠上皮与肌肉组织,再生出新生肠管的时间大约为2周.
表达序列标签(ExpressedSequenceTag,EST)技术是近年兴起的一种高通量
基因筛选和鉴别的有效方法。本研究利用Esl技术对刺参的再生肠组织和正常肠
组织表达序列进行大规模测序分析,旨在从EsT数据中寻找与刺参再生相关的基
因,同时也为今后刺参再生功能相关基因的筛选与克隆奠定良好基础。本文用表
达序列标签方法,对刺参肠再生过程中的表达基因进行了鉴定。
为了研究刺参再生肠组织与正常肠组织当中的差异表达基因,通过定向克隆
法,构建了刺参正常肠组织的cDNA文库(NE)和吐脏后第3—5天再生肠组织的
cDNA文库(PE)#从每一个文库中取
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