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sp3111转基因RNAi小鼠模型的建立及其表型分析 中文摘要 sp3111基因是本实验室筛选鉴定的一种配子特异性表达基因，SP3111蛋白最初被 发现仅在大鼠精子顶体表达，故命名为大鼠精子特异性表达蛋白(rat spermspecific protein 构的膜蛋白。随后在小鼠中发现SP3111蛋白主要分布在精子顶体部位、卵细胞膜及 受精卵膜上，推测其为配子特异性表达膜蛋白。在前期进行的体外抗体封闭实验中观 11 察到，用抗SP31特异性抗体Ab2438处理小鼠精子及受精卵后，能明显降低正常受 精率并导致高“卵割”卵率，提示SP3111可能参与调控精卵间识别过程，并且在小鼠 受精及早胚发育过程中起着重要作用。 RNA干扰(RNAi)技术是在体或离体研究特定基因生物学功能的有效工具，已 被广泛应用于生命科学研究。应用转基因技术，将表达靶基因特异性的shRNA“表达 元件”整合到动物基因组中，产生转基因RNAi动物，该动物模型体内将不同程度地减 少甚至缺失靶基因的表达，为基因功能研究、疾病模型构建以及基因治疗提供了新的 平台。本研究中，我们应用转基因技术，成功构建了sp3111转基因RNAi小鼠模型， 并已稳定遗传至F4代，为进一步在体研究SP3111在生殖过程中的功能奠定了基础。 RT-PCR分析 在获得sp3111转基因RNAi小鼠模型以后，我们首先通过Real．Time mRNA的表达量与比野生雄性小鼠相比，降低了30％以上。其后，我们对sp3111转 基因RNAi雄性小鼠的自然生育力进行检测分析，结果发现，与野生雄性小鼠相比， sp3111转基因RNAi雄性小鼠与同批次雌鼠交配后的后代窝仔数明显下降，提示 SP3111蛋白表达量的下降可能会导致雄性个体生育力的下降。为了研究SP3111蛋白 表达量下降对生育力影响的作用环节，我们用sp3111转基因RNAi雄性小鼠的精子进 行体外受精实验，结果发现其正常受精率降低，而且受精后的“卵割”卵率也异常升高， 与本实验室前期进行的体外抗体封闭实验结果相一致，进一步验证了SP3111蛋白可 能在小鼠受精及早胚发育过程中发挥重要作用。 复旦人学 时伟丽 硕士论文 sp311l转基因RNAi小鼠模型的建立及其表型分析 综合以上研究结果，我们推测，SP3111蛋白作为配子特异表达的蛋白，可能在精、 卵识别和受精过程，以及受精卵的早期发育过程中发挥重要作用；SP3111蛋白表达水 平的降低会导致雄性个体生育力的下降。因此，对其在生殖过程中作用机制的深入研 究将有助于对受精及早胚发育机制的认识，并可以为不育的治疗及新型避孕技术的发 展提供新的思路和途径。 关键词：转基因RNAi；SP3111；表型分析 中图分类号：Q3 复日．大学 时伟丽 硕士论文4 ABSTRACT lab 111 isa identifiedour previously．SP3 gene by sp3111gene gamete—specific rat was identifiedtobe intheacrosomeof sperm， originally specificallyexpressed protein andthereforenamed 311 11