人肠上皮细胞泛素连接酶TRAF6泛素化修饰.pdfVIP

摘要 摘要 沙门氏菌是～种革兰氏阴性肠道杆菌，感染宿主动物后能够引发多种疾病。 沙门氏菌可以通过多种致病效应分子的作用在宿主体内定殖、存活、复制，其 中，III型分泌系统在沙门氏菌致病过程中发挥极其重要的作用。该分泌系统能 够分泌60多种效应分子进入宿主细胞并发挥其调=节宿主细胞生物学过程的功 III型分泌系统分泌的具有肌醇磷脂酶活性的效应 能。SopB是由沙门氏菌SPI．1 蛋白。目前的研究发现，SopB在沙门氏菌感染宿主细胞的过程中，其时间和空 间上的精确调控依赖于其泛素化修饰。基于此，通过体外活性重组技术，分离 到了人肠上皮细胞泛素化修饰SopB的泛素连接酶T‘RAF6。 为了进一步通过体内实验确认TRAF6是能够泛素化修饰沙门氏菌SopB的 泛素连接酶，我们首先通过RNA干扰技术筛选到了TRAF6高效阻断表达的 Henle．407 shTRAF6细胞系。此外还利用TRAF6：基因缺失的鼠胚成纤维细胞 素连接酶。基于SopB的泛素化修饰是能够将SopB从细胞质膜定位至沙门氏菌 内含小泡SCV的关键因素，进一步利用激光共聚焦技术比较了TRAF6对SopB 亚细胞定位的影响，结果表明TRAF6的缺失导