牛传染性胸膜肺炎（CBPP）酶联免疫分析（ELISA）要领.docVIP

牛传染性胸膜肺炎 (CBPP)酶联免疫ELISA） 试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用CBPP)水平。 实验原理本试剂盒用CBPP)。用纯化的CBPP)抗体包被微孔板，制成固相抗，CBPP)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的传染性胸膜肺炎(CBPP)抗体结合，经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值）CBPP)的存在与否。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 阴性对照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 阳性对照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融操作步骤μl。然后在待测样品孔μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻混匀，分钟甩干μl，空白孔除外。 μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟 终止：每孔加终止液50μl，终止反应。450nm波长依序测量各孔的度（OD值）≥1.00; 阴性对照平均值≤0.15 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.10（阴性对照平均值低于0.05按0.05计算） 阴性判定：样品OD值 临界值（CUT OFF）者为传染性胸膜肺炎(CBPP)阴性 阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为传染性胸膜肺炎(CBPP)阳性 注意事项 1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 3．浓洗涤液会有析出，稀释时可在水浴中加温助溶1．；2-8。 FOR RESEARCH USE ONLY contagious bovine pleuropneumonia Drug Names Generic Name：contagious bovine pleuropneumonia ELISA Kit. Purpose This kit allows for the determination of CBPP in Porcine serum, and other biological fluids. Principle of the assay The kit assay CBPP level in the sample，use Purified antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibod