固体曲糖化酶活力测定.docVIP

固体曲糖化酶活力的测定 实验原理： 固体曲在酿造过程中将原料淀粉转化为可发酵糖类的重要酶源。其中其主要作用的是糖化酶，它可将淀粉水解为葡萄糖供微生物 发酵，生成酒精及其它各种相应的白酒成分。固体曲质量好，糖化活力高，原料淀粉利用率高，出酒率也高。故糖化酶活力的高低是衡量固体曲质量的重要指标。 固体曲糖化酶活力定义为：1g绝干固体曲，在30℃、PH=4.6条件下，1h内水解可溶性淀粉为葡萄糖的毫克数。其测定的方法可用修正的蓝-艾农法. 实验试剂： 1. 斐林试剂 2. 0.1%葡萄糖标准溶液（准确称取1g无水葡萄糖(预先烘干)，用水溶解，加5ml浓盐酸，用水稀释至1000ml 3. 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（PH=4.6） 4. 0.01mol/L NaOH溶液 称取4g NaOH ,用水溶解并稀释至1000ml 5. 2%可溶性淀粉溶液 准确称取2g可溶性淀粉（预先于100～105℃烘干），加少量水调匀，倾入80ml沸水中，继续煮沸至透明，冷却后用水稀释至100ml. 实验步骤： 1. 5%固体曲沁出液的提取 称取5.6702g固体曲（以绝干曲计），置于250ml烧杯中，加入90ml水和10ml,PH=4.6的缓冲溶液，摇匀，于30℃水浴中保温沁取1h，每隔15min搅拌一次，有脱脂棉过滤，滤液为5%固体曲沁出液。 2. 固体曲糖化液的制备 吸取25ml 2%可溶性淀粉溶液，置于50ml容量瓶中，于30℃水浴中预热10min.准确加入5ml 5%固体曲沁出液，摇匀，立即计时。于30℃ 3. 测定 吸取斐林甲液、乙液各5ml，置于锥形瓶中，准确加入5ml空白液，并用滴定管预先加入适量的0.1%葡萄糖标准溶液（使后滴定时消耗0.1%葡萄糖标液在1ml以内，且在1min时间以内），摇匀，于电炉上加热至沸腾，立即用0.1%葡萄糖标准溶液滴定至蓝色消失，此次滴定操作需在1min内完成。记录所消耗0.1%葡萄糖标准溶液的体积。 准确吸取5ml糖化液代替5ml空白液，其余操作同上。 计算公式： 糖化酶活力=c(V0-V)× 式中V0---5ml空白液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积，ml V---5ml糖化液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积，ml ---5ml糖化液换算成50ml糖化液中的糖量，g ---5ml沁出液换算成100ml沁出液的糖量，g m---绝干固体曲样品质量，50g 实验记录： 糖化酶活力的测定 空白1 空白2 空白3 试样1 试样2 试样3 绝干固体曲质量（g） 5 葡萄糖浓度(mol/L) 0.05555 预加葡萄糖体积(ml) 7.00 8.00 9.00 7.00 8.00 9.00 消耗葡萄糖标样的体积(ml) 0.87 0.61 0.58 0.68 0.59 0.47 结果计算： 糖化酶活力1=0.005555×（7.87-7.68）×10 糖化酶活力2=0.005555×（8.61-8.59）×× 糖化酶活力3==0.005555×（9.58-9.47）×10× 结果讨论: 在此次实验中，进行初检时，可能滴定的误差较大，导致在复检时有相对的误差。