细胞生物学试验试验一细胞分裂相的观察3学时试验目的：1.DOC

《细胞生物学实验》 实验一 细胞分裂相的观察（3 学时） 一、实验目的： 1、掌握减数分裂标本的制备方法。 2、掌握生殖细胞减数分裂发生过程及各个时期的染色体和细胞变化特点. 3、了解植物生殖细胞的形成过程。 二、实验原理 减数分裂是生殖细胞发生的一种特殊细胞分裂方式，特点是染色体复制一次，细胞分裂两次，形成4个子细胞，每个子细胞染色体数目减半。经过受精作用后，染色体数目恢复，这样在物种延续过程中保证了遗传的相对稳定性和基因的多样性。 三、实验仪器、材料和试剂 （一）仪器、用具：眼科镊子、解剖针、刀片、吸水纸、显微镜、载玻片、盖玻片 （二）材料：普通小麦(Triticum aestivum, 2n=2x=42)幼穗、大葱（Allium fistolosum, 2n=2x=16，花序外包绿色总苞者，长2-3cm）、黑麦（Secale cereale, 2n=2x=14，穗长约6-9cm，旗叶与倒耳叶距离3-5cm）；大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)；玉米(Zea mays, 2n=2x=20) （三）试剂：苯酚品红、醋酸洋红、结晶紫 A液：碱性品红 3g 溶于100ml 70%乙醇中（4℃冰箱中长期保存） B液：取A液10ml，加入90ml 5%苯酚水溶液（两周内使用） 取B液45ml，加6ml冰醋酸和6ml 37%甲醛 四、实验方法与步骤： 1、取材：当小麦处于孕穗或期时，选取约3-5cm的幼穗，取材时间在上午6—9时为好。 2、固定：新鲜幼穗可直接观察，也可剥去外部叶鞘，剪下幼穗，投入Carnoy固定液中固定4-24小时后，倒掉固定液用95%、85%酒精换洗2次，每次1h，然后转入70%酒精中保存备用。 3、涂片与染色：取出一段幼穗，置于盛有蒸馏水的培养皿中，剥下一个小穗，取其中一朵小花，夹取其中一个花药置于清洁的载玻片上，用刀片切去花药的两端，加一滴苯酚品红染液，边染色边用镊子、解剖针用力涂抹挤压花药，挤出花粉母细胞，去掉花药等杂物，盖上盖玻片，用吸水纸吸取四周多余染液，即可观察。如果染色过深，可加上一滴70%酒精分色，然后用吸水纸吸去多余染液再观察。 4、减数分裂时相的观察：先在低倍镜找着细胞，然后用高倍镜观察分裂相，绘图。 5、对于好的压片，可永久制片保留： （1）揭片：将玻片置于-20℃冰箱冷冻30min结冰，或放入液氮处理45～60s，用镊子或解剖刀直接揭开盖片，将有材料面朝上，37℃干燥，将晾干的载片及对应的盖片。 （2）脱水与透明：用由低浓度到高浓度（70％-80％-90％-100％）的梯度酒精冲洗1～2min，或在染缸中脱水2～5min，晾干。 注意：整个脱水透明过程中，必须保持载玻片和盖玻片原来相对的方向和位置，同时注意操作轻巧，以免造成玻片上材料漂失。 （3）封片：在中性树胶中加入1/5～1/4的二甲苯进行稀释，滴一小滴稀释胶在脱水透明后的载玻片中央，将盖玻片盖回原来位置封片。 注意：覆盖盖玻片时，按定位位置水平盖下，使之随着树胶的扩展自然下沉，切不可施加压力或移动盖玻片。如发现封片中树胶有气泡，应让其自然逸出或用针尖烧热后烫一下，使气泡逸出。如树胶滴得过多而逸出盖玻片四周，待树胶凝固后，用脱脂棉蘸二甲苯轻轻擦净逸出的树胶。 封片后平放晾干，镜检，物象清晰符合要求的保存，并贴上标签，注明标本名称、作者姓名和制片日期。 五、实验结果： 六、作业： 1、绘出你观察的细胞减数分裂相图。 注意：构图和布局、勾画轮廓、点点映衬、标注（右侧，引线平直，下方写图题，加括号表面放大倍数） 2、简述减数分裂各时期的特征 七、附： 减数 分裂过程的分期及特征 1．前期I 细线期：染色体呈细长的染色线，螺旋卷曲分散在细胞核内，沿着整条染色线分布着许多染色粒，形似念珠。在细胞核内，核仁清晰可见。 偶线期：同源染色体彼此接近，发生联会。在细线期末，偶线期初，染色体或染色丝在细胞千的部位发生变化。在植物细胞中，染色丝凝集成块，偏于细胞核的一边，称为凝线期，在这—时期，还出现染色质(丝)穿壁转移运动。在动物细胞中，染色丝的一端聚集到核的一侧，而另一端呈放射状扩散，呈花束状，特称花束期。凝线期或花束期一直延续到偶线期结束粗线期开始为止。 粗线期：同源染色体完成配对，成为二价染色体(或成对的同源染色体)，染色体由于螺旋卷由的结果而缩得很短，每一粗线期的染色体具有两条并列的染色单体，成对的同源染色体含有四条染色单体，称为四分体，核仁附着于特定的染色体上。 双线期：同源染色体之间彼此开始分离，但是在一个或多个点上互相交叉而又保持在一起，形似麻花。在该期，同源染色体的两个染色单体之间发生交换。 终变期：染色体缩得更短，交叉移向染色体的户间或末端，呈现V型、8型、O型或X型。染色体常移到核的周围靠近核膜的地