叶绿体色素的提取及理化性质的(定稿)2.pptVIP

叶绿体色素的提取及理化性质的鉴定 授课人: 廖鹏飞 一、实验目的及要求 掌握提取和分离叶绿体中色素的方法 了解叶绿素的物理和化学性质 二、相关知识和实验原理 高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括叶绿素a、叶绿素b、β?胡萝卜素和叶黄素四种 。 叶绿素(Chlorophylls)是叶绿酸的酯，它在植物进行光合作用中吸收可见光，并将光能转变为化学能。叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。 在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a（C55H72O5N4Mg）和叶绿素b（C55H70O6N4Mg）两种结构相似的形式存在，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的醛基所取代。 叶绿素的基本结构见图6-1 在叶绿素分子结构中含有四个吡咯环，它们由四个甲烯基联结成卟啉环，在卟啉环中央有一个镁原子，它以两个共价键和两个配位键与四个吡咯环的氮原子结合成内配盐，形成镁卟啉。在叶绿素分子中还有两个羧基，其中一个与甲醇酯化成COOCH3，另一个与叶绿醇酯化成COOC20H39长链。 脂溶性: 卟啉环头部呈极性, 具亲水性; 叶醇尾部具亲脂性, 难溶于水,仅溶于酒精、丙酮、已醚、已烷等有机溶剂。 叶绿素的物理、化学性质 光学特性 （1）吸收光谱：色素溶液随波长改变而发生光吸收变化的图谱 Chla Chlb的吸收光谱有二个强吸收峰 640——660nm 红光部分 叶绿素特有 410——470nm 蓝紫光部分 卟啉环化合物共有 （2）荧光和磷光 荧光现象：Chl溶液在透射光下呈绿色，而反射光下呈红色的现象。强度大，寿命短（10-9秒） 磷光： Chl溶液停止光照后，仍能在一定时间内放出暗红色的光。 寿命长（10-2秒——10-3秒） 皂化反应 Chla、Chlb 是双羧酸的酯 一个羧基被甲基酯化 可发生皂化反应 另一个羧基被叶醇基酯化 COOCH3 C32H30ON4Mg + 2KOH COOC20H39 COOK C32H30ON4Mg + CH3OH+C20H39OH COOK 取代反应 卟啉环中的Mg2+可被H+、Cu2+、Zn2+取代，被Cu2+、Zn2+取代后仍保持绿色。用酸处理叶片，H+易进入叶绿体，置换镁原子形成去镁叶绿素，使叶片呈褐色。去镁叶绿素易再与铜离子结合，形成铜代叶绿素，颜色比原来更稳定。 人们常根据这一原理用醋酸铜处理来保存绿色植物标本。 类胡萝卜素(Carotenoids)是一类不饱和的四萜类碳氢化合物，胡萝卜素有三种异构体，即α-、β?和 γ?胡萝卜素，其中 β?胡萝卜素含量最多，也最为重要。β? 胡萝卜素还具有维生素A的生理活性，其结构是由两分子维生素A在端链失去两分子水结合而成。在生物体内，β?胡萝卜素受酶催化氧化即形成维生素A。 叶黄素(3，3`-二羟基-α-胡萝卜素，lutein，C40H56O2)是一种常见的氧化型的类胡萝卜素。 β?胡萝卜素和叶黄素的结构式如图6-2 类胡萝卜素吸收光谱都在蓝紫光部分，所吸收的光能传递给叶绿素用于光合作用，保护叶绿素分子不被氧化或阳光破坏。 叶绿素a和b、β?胡萝卜素、叶黄素都是难溶于水，易溶于丙酮、乙醇、乙醚、石油醚等有机溶剂溶剂。根据它们在有机溶剂中的溶解特性，可将它们从植物叶片中提取出来。 纸色谱法是分离叶绿体色素最简单的方法，它是以滤纸为惰性支持物，滤纸纤维一般能吸收约20 % 的水分，其中有6~7 % 以氢键形式与纤维素上的羟基结合，构成纸色谱的固定相。利用混合色素中各个成分物理、化学性质的差别，在展开过程中，被分离组分在展开剂和固定相之间不断进行分配，并以不同的速度移动，达到相互分离的目的。 　　　　四、实验器材 材料与试剂： 菠菜、空心菜等绿色植物、脱脂棉等、固体碳酸钠或碳酸钙、石英砂、丙酮、石油醚、蒸馏水、饱和NaCl水溶液、醋酸铜结晶、NaOH-甲醇溶液等。 层析液配方： 石油醚20ml+丙酮2ml+苯1ml 仪器设备： 天平、水浴锅、镊子、玻璃漏斗、分液漏斗、研钵、有塞试管、等等。 五、实验方法与步骤