霉菌大肠菌群金黄色葡萄球菌检测中常见问题的分析.PPT

霉菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌检测中常见问题的分析 青岛海博生物技术有限公司 姜文生 2004-12-24 主要内容 霉菌 大肠菌群 金黄色葡萄球菌 霉菌 霉菌：不是分类学上的名词，而是一些丝状真菌的通称，属真菌的一部分.其对人类的作用具有双重性:有利的方面是它可以用来酿造、工业发酵、抗生素和酶制剂的生产等;不利方面是它能引起农副产品、食品、原料及器材的腐烂，也感染并引起人类和动、植物的多种疾病. 霉菌在孟加拉红琼脂上的菌落特征 酵母菌在孟加拉红琼脂上的菌落特征 ※检测中的注意事项： 1、 取样的代表性。 2、取样工具的无菌。空气中霉菌的孢子含量很高，所以，取样的工具、容器等要经过严格的高压灭菌。 3、 检样的操作。 （1）由于霉菌易被携带，所以，检样时操作人员应尽量避免自身携带的可能。 （2）样品的均质及充分振摇。因为有些孢子是连成串的，故均质和振摇能使其充分散开，同时，在各梯度连续稀释时，也要用灭菌吸管反复吹吸几次，使孢子充分散开。 4、培养温度和时间。培养温度25-28℃培养，3天后观察，需培养观察一周。 ※霉菌检验中常用的培养基：孟加拉红琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、察氏琼脂、高盐察氏琼脂等 。 ※检样中常见的问题： 1、?不同稀释度计数结果相同。 2、 不生长或生长很好连成片无法计数。 ※原因： （1）稀释时未经反复振摇，吹吸，导致孢子未充分散开，影响了计数的结果。 （2）由于培养基不适宜，PH值低等，致使生长较慢。 （3）观察时间的掌握。真菌生长较慢，故需3d后才能观察出结果。每天都要观察结果。 大肠菌群 大肠菌群：是只一群能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏无芽孢杆菌 。该菌主要来源于人畜粪便。 检测该菌的方法主要有MPN法，平板计数法。 MPN法中主要用到的是LST、BGLB、EC肉汤等。 平板计数法主要用DC、VRBA等。 ※在检测该菌时易出现的问题： 1、? LST、BGLB、EC等在灭菌时小倒管中气泡排不尽。 2、气泡不易观察。 3、VRBA、DC平板上菌落特征不易辨认。 ※原因： 1、在分装LST、BGLB、EC时，小倒管中有水柱；此外，高压灭菌时，需急排气，灭菌后迅速冷却。 2、观察气泡时，要对光倾斜试管，使小倒管紧贴在试管壁上，便于观察。 3、熟悉大肠杆、大肠菌群在上述平板上的特征,必要可做一些阳性的对照。有些食物残渣会影响观察结果，这样需要我们在培养前仔细观察平板的状态，大的食物残渣可以做一些标记。 大肠菌群在LST中的生长情况 大肠菌群在DC上的菌落特征 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌：是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、败血症等，其毒性的强弱取决于产生的毒素和侵袭性酶，例溶血素酶、杀白细胞素、血浆凝固酶、脱氧核糖核酸酶。 B-P琼脂上金黄色葡萄球菌有黑色的菌落中心，周围有半透明的卵磷脂沉淀环。 甘露醇卵黄琼脂上的特征是菌落黄色，周围也有卵磷脂沉淀环。 甘露醇高盐琼脂上的菌落特征与甘露醇卵黄琼脂上的菌落特征相同，不过，菌落周围没有卵磷脂沉淀环。 ? 金黄色葡萄球菌在B-P上的菌落特征 ※检样中常见的问题： 1、? 平板的状态：透明、有絮状物。 2、? 凝固酶实验的观察。 ※原因： 1、不同的厂家的培养基平板制好后的状态有所不同，主要取决于亚碲酸钾卵黄增菌液的不同。我们公司采用的鸡蛋是山鸡蛋，卵磷脂含量较高，因此制备好的平板一般透明度较好，接种金黄色葡萄球菌后，菌落特征较易观察。 2、在添加亚碲酸钾卵黄增菌液时，温度的掌握，不宜太高，过高易使卵黄变性，也不应太低，太低琼脂易凝固。 3、将金黄色葡萄球菌接种到兔血浆上后，每半小时观察一次，观察凝固时，将血浆轻轻倾斜或慢慢倒置，如有流动，既证明没有凝固。如若不明显，可补做DNA酶实验。 血浆凝固酶实验观察 在微生物操作中常见问题的讨论与分析 青岛海博生物技术有限公司 姜文生 2004-12-24 主要内容 1、划线获得单个菌落的方法 2、涂布和倾注的区别 3、培养基配制时应注意的问题 4、平板的保存 5、产品的保存 6、观察时间的掌握 1、划线获得单个菌落的方法。 划不出单个菌落的原因： （1）?????? 平板上有过多的水分 （2）?????? 划线时接种环未经反复灼烧 （3）?????? 多区划线，三区或四区划线 四区划线的方法 2、? 涂布和倾注的区别： 涂布利于观察，但由于涂布棒上会带有少量的菌液，影响计数的准确性。 涂布更为准确，但不利于观察菌落的状态。 3、? 培养基配制时应注意的问题 （1）灭菌温度要严