三相鼓泡塔生物反应器培养云芝菌合成漆酶-生物通.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（３）：９５～９９ 三相鼓泡塔生物反应器培养云芝菌合成漆酶 １ ２ １ 高恩丽 　仲伟佳 　肖国光 （１九江学院化学化工学院　九江　３３２００５　２　九江学院继续教育学院　九江　３３２００５） 摘要　为了提高云芝菌发酵生产漆酶的效率，提出了一种利用自絮凝菌丝球在三相鼓泡塔生物 反应器中重复分批发酵产漆酶的新方法。在优化后的产酶条件下，考察维生素 Ｃ的添加浓度对 漆酶活力的影响，并通过在培养基中添加维生素Ｃ进行漆酶多批次培养。研究结果表明，维生素 Ｃ的添加浓度为１．５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，可使漆酶活力提高２．６倍。连续进行了１０批培养，每批最大漆 酶的活力均在１０００Ｕ／ｍｌ以上，最高酶活出现在第５批为１９１９．６Ｕ／ｍｌ，总培养时间达２５ｄ。此方 法所得漆酶对染料靛蓝具有明显的脱色降解作用，在介体１羟基苯并三唑（ＨＢＴ）用量０．１０％，漆 ? 酶用量１００Ｕ／Ｌ条件下作用４０ｍｉｎ时，靛蓝脱色率达到９６．７％。该方法采用的三相鼓泡塔生物反 应器性能稳定、菌丝球可重复使用，该方法有利于漆酶的高效、规模化生产。 关键词　三相鼓泡塔生物反应器　云芝菌　漆酶　靛蓝　染整废水　脱色 中图分类号　ＴＱ９２５ 　　漆酶是一种多功能氧化还原酶，具有广泛的底物 ［１～３］ １　材料与方法 作用范围 。其催化中心是铜，伴随着 Ｏ 被还原成 ２ ＨＯ，漆酶可催化芳香族化合物的氧化降解。靛蓝是一 １．１　菌　种 ２ 种芳香族染料，广泛应用于印染工业。在牛仔布的染 　　云芝菌来自新西兰木材防腐研究中心。菌丝体于 整及水洗过程中，会形成大量含靛蓝染料的工业废水， ４℃保存在马铃薯 葡萄糖 琼脂（ｐｏｔａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅａｇｅｒ， ? ? ? ? ［４］ 不但对环境造成严重的污染 ，而且废水中的靛蓝会 ＰＤＡ）斜面培养基上。 ［５］ 返沾到牛仔布的表面，影响服装的水洗效果 。近年 １．２　培养基 来，利用漆酶催化靛蓝染料的降解，对印染废水进行脱 　　种子培养基：ＰＤＡ培养基。发酵培养基 各组分的 色生物降解方面的研究工作已经引起了国内外的广泛 质量浓度为：葡萄糖 １．１ｇ／Ｌ，麦芽糖 １．１ｇ／Ｌ，玉米皮 ［６］ 关注 。 １．１ｇ／Ｌ，豆饼粉１．４２９ｇ／Ｌ，ＮａＨＰＯ０．２ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ · ２ ４ ４ 　　云芝菌是产漆酶的优良菌株，但其培养周期通常 ７ＨＯ０．５ｇ／Ｌ，微量元素２０ｇ／Ｌ。调节培养基的起始ｐＨ ２ ［７］ 较长 。本文将采用三相鼓泡塔作为固定化培养产酶 值为４．５，１２１℃灭菌２０ｍｉｎ。 的生物反应器，气液固三相分别为无菌空气、培养液和 　　微量元素中各组分的质量浓度为：维生素 Ｂ １００ １ 云芝菌自絮凝菌丝球。自絮凝菌丝球在三相鼓泡塔生 ｍｇ／Ｌ，ＣａＣｌ１００ｍｇ／Ｌ，ＦｅＳＯ ·７