Bt 水稻T1C-19 中外源基因的三引物多重PCR 检测方法A Tri-primer .PDF

分子植物育种( 网络版), 2013 年, 第 11 卷, 第 1106-1113 页 Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2013, Vol.11, 1106-1113 技术主题 Technology Feature Bt 水稻 T1C-19 中外源基因的三引物多重 PCR 检测方法 查中萍 , 万丙良 , 杜雪树   湖北省农业科学院粮食作物研究所, 湖北省粮食作物种质资源创新与遗传育种重点实验室, 武汉, 430064  通讯作者：ricewanbl@126.com ；  作者  分子植物育种, 2013 年, 第 11 卷, 第 16 篇 doi: 10.5376/.2013.11.0016 这是一篇采用 Creative Commons Attribution License 进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条 件的使用与传播。 引用格式( 中文) ： 查中萍等 , 2013, Bt 水稻 T1C-19 中外源基因的三引物多重 PCR 检测方法 , 分子植物育种 (online), 11(16): 1106-1113 (doi: 10.5376/.2013.11.00 16) 引用格式(英文) ： Zha et al., 2013, A Tri-primer Multiplex PCR Method for the Exogenous Genes in Bt Rice T1C-19, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding), 11(16): 1106-1113 (doi: 10.5376/.2013.11.0016) 摘 要 转 cry1C 基因水稻 T1C-19 是一个优良的抗螟虫水稻育种资源。本研究目的在于研发一种用于检测 T1C-19 及其衍 生材料中外源基因的三引物多重 PCR (polymerase chain reaction, PCR)检测方法。根据 T1C-19 中插入的外源基因序列和插入 位点左右旁侧水稻基因组序列设计了 3 个PCR 引物C1、C2 和 C3，并对多重PCR 体系进行了优化。结果表明，0.5 μL 10 μmol/L C1+0.4 μL 10 μmol/L C2+0.2 μL 10 μmol/L C3 的多重PCR 体系可以准确区分 cry1C 基因纯合、杂合和阴性三种基因型，纯合 体和阴性材料中均只扩增出一条 DNA 片段，纯合体中的片段大小为 512 bp，而阴性材料中的片段大小为 386 bp，杂合体中 则同时扩增出这两条片段。该体系的建立为利用 T1C-19 进行抗螟虫水稻育种提供了一个简便有效的基因鉴定技术。 关键词 转基因水稻; 多重 PCR; 共显性标记; cry1C; T1C-19 A Tri-primer Multiplex PCR Method for the Exogenous Genes in Bt Rice T1C-19 Zha Zhongping , Wan Bingliang , Du Xueshu Food Crop Research Institute, Hubei Academy of Agricultural Science, Hubei Key Laboratory of Crop Germplasm and Genetic Improvement, Wuhan, 430064, P.R. China  Corresponding author, ricewanbl@126.com;    Authors Abstract  T1C-19 is a transgenic rice possessing Bacillus thuringiensis (Bt) insecticide crystal protein encoding gene cry1C, which has a good resistance to leaf folder and stem borer, and can