影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果因素.docVIP

影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素： 【1】电泳介质pH的影响： 对于蛋白质及氨基酸等两性物质，电泳介质的pH影响蛋白质的电泳情况 即可决定蛋白质的带电量（Q）。 pI-pH0，分子带正电荷，向负极泳动； pI-pH0，分子到负电荷，向正极泳动； pI-pH=0，兼性离子，净电荷为零。 pH偏离等电点越远，分子所带净电荷越多，其泳动速度越快。 所以，当┃pI-pH┃接近零时，分子处于等电状态，不移动，影响条带清晰度，从而影响实验分离效果。 【对应注意点】由于血清蛋白质的等电点多在pH 4～6 之间，因此，分离血清蛋白常用pH 8.6的巴比妥缓冲液或者三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液。 【2】缓冲溶液的离子强度： 离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰； 离子强度高，电泳速度慢，但区带分离较清晰。 离子强度过低，缓冲溶液的缓冲量小，不易维持pH的恒定； 离子强度过高，则降低蛋白质的带电量使电泳速度减慢。 所以，当离子强度过低时，电泳速度虽快，但易引起分离区带不清晰； 当离子强度过高时，虽分离区带清晰，但点用速度过慢，所以要选择合适的离子强度。 【对应注意点】离子强度的选择要合适，一般常用的离子强速为0.02～0.2之间。 【3】电场强度的影响： 电场强度和电泳速度成正比关系。电场强度一每厘米的电势差计算