常用试剂配表.docxVIP

实验常用试剂、缓冲液的配制试剂成分/用量配制方法1M Tris-HCl（pH 6.6, 7.4, 7.6等）Tris base 121.1g 加入约800mL的去离子水，加入浓盐酸调节pH值，定容至1L。?室温保存。1.5 M Tris-HCl??（pH8.8）Tris base 181.7g加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。用浓盐酸调pH值至8.8，定容至1L。室温保存。?10％（W/V）SDSSDS 10g/100mL加入80mL的去离子水，68℃加热溶解。浓盐酸调节pH值至7.2，定容至100mL，室温保存。5 M NaClNaCl 292.2g 加入约800mL的去离子水后搅拌溶解后定容至1L。1 M DTTDTT 3.09g 加入到50mL塑料离心管内。加20mL的0.01 M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。适量分成小份，-20℃保存。100mg/ml AmpicillinAmpicillin5g/50mL置于50mL离心管中。加入40mL灭菌水，溶解后定容至50mL。用0.22μm滤膜过滤除菌。分装（1mL/份）后，-20℃保存。100mg/ml kanamycin sulfateKanamycin sulfate 5g/50mL置于50mL离心管中。加入40mL灭菌水，溶解后定容至50mL。用0.22μm滤膜过滤除菌。分装（1mL/份）后，-20℃保存。1M IPTGIPTG 5g/21 mL置于50mL离心管中。加入10mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至21mL。用0.22μm滤膜过滤除菌。分装（1mL/份）后，-20℃保存。10％（W/V）过硫酸铵（AP）Sodium persulfate 1g/ 10mL加入10mL的去离子水后搅拌溶解，贮存于-20℃。??注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右。10×PBS（T） BufferNaCl???????? ???????? ? 80 g KCl??????????????????? 2gNa2HPO4???????? ??14.2 g KH2PO4????????? ?2.7g( Tween-20 10mL )称量各试剂置于1L烧杯中。向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。滴加HCl将pH值调节至7.4，（量取10mL Tween-20）定容至1L。（高温高压灭菌后）室温保存。10×TBS（T） BufferNaCl???????? ?????????? ? 80 g KCl????????????????????? 2gTris base 30g(Triton X-100 10mL)称量各试剂置于1L烧杯中。向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。滴加HCl将pH值调节至7.4，（量取10mL Triton X-100）定容至1L。室温保存。10×Tris-GlycineBuffer （Running Buffer）Tris?????????? 30.2gGlycine?????188g 10%SDS（w/v）??100mL先称量Tris base和甘氨酸，加入约800mL的去离子水，搅拌溶解后加入100mL 10%SDS100 mL并加去离子水定容至1L后，室温保存。5×SDS??Loading Buffer1M Tris-HCl 12.5mL 10%SDS 50mLBPB 0.25gGlycerol 25mL先配置1M Tris-HCl 溶液(pH6.8)，量取BPB，置于100mL烧杯中并加入10mL去离子水溶解，加入其余试剂定容至100mL.摇匀后用滤纸过滤残渣。于室温保存（1mL/份）。分装后在使用前将25μl的2-ME加到每小份中。（加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右）10×Transfer BufferGlycin 144gTris base30.3（Methanol200mL）先称量Tris base和甘氨酸，加入约600mL的去离子水，搅拌溶解后定容至1L，储存于4℃。使用时取100mL溶液稀释至800mL，加入200mL甲醇配置为工作液。考马斯亮蓝R-250染色液Coomassie blue R-250 1gEthanol 250mLAcetic acid 100mL称取R-250，置于烧杯。加入250mL的乙醇，搅拌溶解后加入100mL的乙酸（醋酸），混匀后加入650mL的去离子水，用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。Coating BufferNaHCO3 8.4gNa2CO3·H2O4.16g称取试剂置于烧杯中加入800mL去离子