开题报告--不同温度对解磷芽孢杆菌产孢率的影响.docVIP

本科生毕业论文(设计)开题报告书 题 目 ： 不同温度对解磷芽孢杆菌产孢率的影响 学生姓名 ： XXX　　 　 学 号 ：　 xxxxxxxxxxxx　　 　 专业班级 ：　 xxxxxxx 指导老师 ：　 xxxxx　　　 2015年01 月08日 论文（设计）题目 不同温度对解磷芽孢杆菌产孢率的影响 课题目的、意义及相关研究动态： 目的：本研究旨在不断优化提高解磷芽孢杆菌产孢率的工艺条件。 意义： 磷对植物生长发育和成熟发挥着重要作用，但是土壤中大部分有机磷和无机磷处于植物不能直接吸收、利用的形态[1] 。使用磷化肥后由于土壤的固定化作用，大部分磷与土壤中的Ca2+ 、Fe2+、Fe3+、A13+ 结合，形成难溶性磷酸盐[2] ，出现了肥效下降、利用率降低等现象。长期大量的使用化肥会明显造成土壤板结、土壤保水力下降、草地退化、荒漠化严重等不良后果。而解磷微生物产生的植酸酶、核酸酶和磷酸酶等加速了植酸、核酸、磷脂等含磷有机化合物的分解，其分泌的有机酸可与无机磷进行螯合[3] ，使难溶磷转化成为有效磷，可以促进磷素释放，提高植物磷素营养。将解磷微生物作为生物肥料，生产成本低，应用效果好，不污染环境，施用后不仅能使农作物增产，而且可改善土壤结构，提高土壤有机质含量，提高土壤中磷的利用效率，节肥增产，并有改良盐碱地以及对培育和充分发挥土壤生态肥力、保持农业生态环境平衡的重要意义。芽孢是一种休眠体，是产芽孢菌在生长发育后期在细胞内形成的 圆形或椭圆形、厚壁含水量低、抗逆性强的休眠构造[4]。由于芽孢不进行新陈代谢活动，能经受多种环境伤害，包括高盐、高渗、热、紫外线、多种溶剂、酸、碱等试剂的处理。所以本研究旨在将筛选出的高效降解有机磷的细菌,通过液体摇瓶发酵，优化培养基及培养条件寻求该菌株产芽孢的最大化，为这种复合微生物肥的研制奠定基础。 课题的主要内容（观点）、创新之处： 主要内容：控制培养基碳源总量，在新配方中用部分葡萄糖代替相应量的麦麸作为碳源。将高效解磷菌混合发酵并设置适宜培养温度梯度，最终通过平板菌落数计算芽孢产率的变化来确定最适宜的温度。 创新之处：多种解磷菌混合发酵利用混菌之间互利共栖协同作用，提高产率，省工节能，简化工艺设备，使生化反应更完善。 研究方法、设计方案： 研究方法：1、采用稀释平板计数法测定培养基中的菌落数 2、采用对样品水浴加热再稀释平板菌落计数法测定芽孢数。 设计方案：将高效解磷菌培养基新老配方试验进行对比，并对混合发酵的发酵温度设置若干组，最终通过稀释平板菌落数和来衡量不同温度下芽孢产率情况。 操作步骤： 1．10g，磷矿粉10g，(NH4)2SO4 0.5 g，NaC1 0.3g，MgSO4·7H2O 0.3g，KC1 0.3g，MnSO4·4H2O 0.03 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，琼脂18～20g。）→加水搅拌（定容至1000ml）→加热溶解→调pH至6.8～7.0→分装→高温高压灭菌→冷却→备用。2． 原配方：麦麸100g 称重 →加水搅拌→定容（1000ml）→ 新配方：麦麸50g，葡萄糖3.5g 煮沸（100℃）→降温至95℃（或不降温）→加高温酶（淀粉酶，≥5ml/20kg麦麸粉）→95℃保温水解30min→降温至60℃以下（50～60℃）→加糖化酶（≥5ml/20kg麦麸粉）→边搅拌边保温（50℃左右）30min→得酶解产物→添加矿质元素（磷矿粉10g，(NH4)2SO4 0.5 g，NaC1 0.3g，MgSO4·7H2O 0.3g，KC1 0.3g，MnSO4·4H2O 0.03 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，）→调pH至6.8～7.0→定 容（200ml）→分装（50ml/瓶）→高压蒸汽灭菌121℃,30min→备用。3．℃~40℃）→90~120r/min 摇瓶培养（20h~36h）→取菌悬液备用。 稀释平板菌落计数与检测芽孢 按10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7系列稀释 → 用移液枪吸取10-5，10-6，10-7 三个稀释浓度样品各0.1 mL → 涂抹平板 → 28 ℃恒温箱倒置培养→ 按24、36、48 、60、72h取出观察生长情况→菌落计数； 取10-2，10-4