酵母丙氨酸转移核糖核酸双氢尿核苦(D) - 上海有机化学研究所.PDF

化学学报 ACTA CHIMICA SIl\ ICA 1984, 42 ,1293-1301 酵母丙氨酸转移核糖核酸双氢尿核苦(D) 环区九核营酸(14~22) 的合成 陈德化势 搂聚兴 杨炳辉 吴莲芬 陈法贤 〈中国科学院士;每生物化学研究所) 刘德宫 (北京大学生物系) 用有机合成或酶促合成的 AGDCGG 为受体，以过量的。pDAGp 为供休，应用 1\RNA 连接 酶p 成功地合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸(tRNA~川的双氢尿核昔(D)环区九核昔九磷酸 AGDCGGDAGp. 在脱去:3一端磷酸基团后，得九核苦八磷酸.产物经序歹1] 分析证明，与 AGDCGGDAG 完全符合本文也进行了相应子D 环区九核苦酸的组成][f生 AG， AGDC , GG , GGp 和 DAG 的 5 磷酸化和它们之间连接的条件探索p 发;Ijl，了 3--， DMP 和 DAG 的 5一磷酸化需在 0 5_10 C 下进行p 可获近定:髦的产率. AGDCGGDAGp 己用于 tRNA~la 的全分子合成. 自 197立年飞RNA 连接酶的报道发表以来C132 已经作为合成低聚核昔酸片段和核酸大分 子的重要工具.我国ω 和日本[3J 等国的科学工作者都曾进行了大量的研究工作.但是，含稀有 R 碱基-双氢尿核背(D) 的片段，用14 NA 连接酶连接，至 1981 年尚未见有报道.因此，如用 T RNA 连接酶连接含有双氢尿核昔(D)的片段，情况如何F 当时尚不清楚.我们为了合成酵 4 母丙氨酸转移核糖核酸(古RNA;l) 双氢尿核昔 D 环区九核昔酸AGDOGGDAG(酌，自 1980 1981 年详细地进行了探索性的研究(图 1). 0 本工作开展初期p 我们发现在 37 0 下， DMP 和 DAG 2 ， [4J 的 5-磷酸化的产率很低(图 0 2) ，即使增加酶量，产率也没有明显提高.而在 5___10 0 下进行5飞磷酸化，则可以获得95% 的产率(图 3). l6J 随后，我们对相应于九核背酸1 的组成片段AG[飞 AGDO(3) [气 GG ， GGp :4/4J 手11 DAG(岛的连接性能选行了研究，着重观察化合物2 和化合物8 在 T RNA 连接酶作用条件 4 下，其作为供、受体的反应性能(见表 1)ω RN 从表1 所列的连接率数据可以看出: 1) 平DAG 在l4 A 连接酶反应条件下，不易自身 连接，其连接产率只有 5%. 2)GG 不能作为受体而与 *pDAG 进行连接，不管增加民RNA 连 接酶用量或变更反应温度，都不发生连接. 3) 用 8 作受体与警pGG 连接，经反复实验表明，连 接是不成功的.若以平GGp 代替、GG，其连接率仅只 139丸即使用活性的焦磷酸酷 1984 年9 月 7 日收到. 陈海宝，庄建华参加部分工作.除特别注明者外.本文所述之核音酸均系 3 核糖核音酸.采用国际惯用的缩名. 曾通讯联系人- X 同位素 AGDC