花生疮痂病病原菌分离技术研究.PDF

中国油料作物学报 ２０１７，３９（３）：３８６－３９２ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１７．０３．０１４ 花生疮痂病病原菌分离技术研究  薛彩云，傅俊范 ，周如军，崔建潮，徐　?，赵杰锋，李元杰 （沈阳农业大学植物保护学院，辽宁 沈阳，１１０８６６） 　　摘要：花生疮痂病菌在人工培养条件下生长缓慢、产孢困难，难以进行分离纯化。为了建立一套高效、实用的 花生疮痂病菌组织分离和单孢分离纯化技术，研究了取样时期、取样部位、表面消毒时间、采后存放时间对组织分 离法分离频率的影响，及不同培养基和取样时期对单孢分离技术的影响。结果表明，采用组织分离法，叶片分离频 率显著高于茎秆，叶片表面适宜消毒时间１～３ｍｉｎ，采后冷藏４８ｈ内分离频率差异不显著，不同采集时期对叶片病 菌分离频率无显著影响；采用改进的稀释平板法成功分离纯化到大量单孢子菌落，ＰＬＤＡ（花生煎汁培养基）上的单 孢子菌落多于ＰＤＡ，对杂菌的抑制作用显著大于ＰＤＡ，发病早期和中期的病秆可获得大量单菌落，但发病后期只能 获得极少单菌落。 关键词：花生疮痂病；Ｓｐｈａｃｅｌｏｍａａｒａｃｈｉｄｉｓ；分离技术；单孢分离；组织分离 中图分类号：Ｓ４３２．４＋４，Ｓ５６５．２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１７）０３－０３８６－０７ ＡｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＳｐｈａｃｅｌｏｍａａｒａｃｈｉｄｉｓｆｒｏｍｉｎｆｅｃｔｅｄｐｅａｎｕｔ  ＸＵＥＣａｉ－ｙｕｎ，ＦＵＪｕｎ－ｆａｎ ，ＺＨＯＵＲｕ－ｊｕｎ，ＣＵＩＪｉａｎ－ｃｈａｏ，ＸＵＺｈｅ，ＺＨＡＯＪｉｅ－ｆｅｎｇ，ＬＩＹｕａｎ－ｊｉｅ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０８６６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｃａｕｓａｌａｇｅｎｔｏｆｐｅａｎｕｔｓｃａｂｄｉｓｅａｓｅｉｓｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｉｓｏｌａｔｅｄｕｅｔｏｉｔｓｅｘｔｒｅｍｅｌｙｓｌｏｗｇｒｏｗｔｈａｎｄ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｓｐｏｒｕｌａｔｅｏｎａｇａｒｍｅｄｉａ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｔｉｓｓｕｅｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｓｉｎｇｌｅ－ｓｐｏｒｅｉｓｏｌａ ｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｓｏｌａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｆｒｏｍｌｅａｖｅｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｓｔｅｍｓ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｓｕｒｆａｃｅ－ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇｔｉｍｅｗａｓ１－３ｍｉｎ，ｓａｍｐｌｉｎｇｔｉｍｅａｎｄｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅ ｗｉｔｈｉｎ４８ｈａｆｔｅｒｓａｍｐｌｉｎｇｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｏｎｉｓｏｌａｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙ．Ａｂｕｎｄａｎｔｓｉｎｇｌｅ－ｓｐｏｒｅｃｏｌｏｎｉｅｓ ｃｏｕｌｄｂｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｉｍｐｒｏｖｅｄｄｉｌｕｔｉｏｎ－ｐｌａｔｅｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｓｉｎｇｌｅ－ｓｐｏｒｅｃｏｌｏｎｉｅｓｏｎｐｅａｎｕｔｌｅａｆｄｅｃｏｃ ｔｉｏｎａｇａｒ（ＰＬＤＡ）ｗａｓｍｏｒｅｔｈａｎｔｈａｔｏｎＰＤＡｍｅｄｉｕｍ，ＰＬＤＡｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｕｎｄｅｓｉｒｅｄｍｉｃｒｏｂｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒｏｆｓｉｎｇｌｅ－ｓｐｏｒｅｃｏｌｏｎｉｅｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｄｉｌｕｔｉｏｎ－ｐｌａｔｅｍｅｔｈｏｄａｔｅａｒｌｙａｎｄｍｉｄｄｌｅｓｔａｇｅｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗａｓｓｉｇ ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｌａｔｅｓｔａｇｅ，ａｎｄｆｅｗｓｉｎｇｌｅ－ｓｐｏｒｅｃｏｌｏｎｉｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｔｔｈｅｌａｔｅｓｔａｇｅ． Ｋｅｙｗｏ