一种基于光学模拟的荧光定量PCR分析仪校准方法 - 计量学报.PDF

第３６卷　第６Ａ期 计　　　 量　　　学　　　报 　Ｖｏｌ３６，№６Ａ ２０１５年１２月 ＡＣＴＡ　ＭＥＴＲＯＬＯＧＩＣＡ　ＳＩＮＩＣＡ 　 Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１５ ｄｏｉ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１０００１１５８２０１５ｚ１１６ 一种基于光学模拟的荧光定量ＰＣＲ分析仪校准方法 陈如冰，　胡涵星，　徐含青，　袁伟伟 （苏州市计量测试研究所，江苏 苏州２１５１２８） 摘要：介绍了荧光定量ＰＣＲ分析仪的工作原理和结构特点，提出了该仪器的校准项目，以及一种基于光学模 拟的校准方法。通过采用可变光强的ＰＣＲ温度校准仪和ＰＣＲ荧光校准仪，合理布置温度传感器和ＬＥＤ光源位置， 对荧光定量ＰＣＲ分析仪的温度控制性能和定量准确度进行了校准，并对可能影响校准结果的不确定度分量做了 说明。 关键词：计量学；ＰＣＲ；荧光；定量；温度；校准 中图分类号：ＴＢ９４２　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１０００１１５８（２０１５）６Ａ００６３０４ ＡＮｅｗＣａｌｉｂｒａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｆｏｒＲｅａｌｔｉｍｅＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲＡｎａｌｙｚｅｒｂｙＯｐｔｉｃａｌＳｉｍｕｌａｔｉｏｎ ＣＨＥＮＲｕｂｉｎｇ，　ＨＵＨａｎｘｉｎｇ，　ＸＵＨａｎｑｉｎｇ，　ＹＵＡＮＷｅｉｗｅｉ （ＳｕｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔａｎｄＴｅｓｔｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ２１５１２８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｗｏｒｋｉｎｇｐｒｉｎｃｉｐｌｅａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎａｌｙｅｒｉｓｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ， ａｎｄａｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄｏｎｏｐｔｉｃａｌｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｉｓｐｕｔｆｏｒｗａｒｄ．ＵｓｉｎｇｖａｒｉａｂｌｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆＰＣＲｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｃａｌｉｂｒａｔｏｒ ａｎｄＰＣＲｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｃａｌｉｂｒａｔｏｒ，ａｎｄａｒｒａｎｇｉｎｇｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｅｎｓｏｒａｎｄＬＥＤｌｉｇｈｔｓｏｕｒｃｅ，ｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲａｎａｌｙｚｅｒｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｃｏｎｔｒｏｌｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｃｃｕｒａｃｙａｒｅｃａｌｉｂｒａｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｗｈｉｃｈｍａｙｉｎｆｌｕｅｎｃｅｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎａｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｅｔｒｏｌｏｇｙ；ＰＣＲ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ；ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ；ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ 量分析的ＰＣＲ分析仪。与传统 ＰＣＲ分析仪相比， １　引　言 具有特异性强，污染干扰少，自动化程度高等特点， 是ＰＣＲ检测技术的一次飞跃，广泛应用于各类医学 ＰＣＲ分析仪又称聚合酶链反应分析仪，是一种 实验室、司法鉴定实验室、检验检疫实验室和基因测 基于聚合酶链反应 （ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ， 序公司，进行各种生物学研究或检验，其使用量飞速 ＰＣＲ），模拟ＤＮＡ或 ＲＮＡ复制过程，在模版、引物、 增长。 聚合酶等存在条件下，对特定 ＤＮＡ或 ＲＮＡ片段进 然而，与快速增长的荧光定量 ＰＣＲ分析仪相 行快速扩增和检测分析的仪器设备。荧光定量 比，针对此类定量ＰＣＲ分析仪的校准方法研究却不 ＰＣＲ分