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生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, October 25; 24(10): 1837-1842
Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
技术与方法
toxR 基因作为荧光定量PCR 靶基因设计TaqMan 探针
快速检测副溶血弧菌
1 1 1,2 1 2 1 2
覃倚莹 , 吴晖 , 肖性龙 , 杨晓泉 , 张经纬 , 余以刚 , 李惠芳
1 华南理工大学轻工与食品学院, 广州 510640
2 深圳太太基因工程有限公司, 深圳 518057
摘 要: 以toxR 基因为靶基因, 通过优化反应条件建立了快速检测副溶血弧菌的TaqMan 实时荧光PCR 方法。特异性
试验表明, 该方法能选择性检测副溶血弧菌, 而与金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特杆菌等多种常见的食源性病
原菌没有交叉反应; 灵敏度试验表明, 该方法最少可检测到25 个拷贝的toxR 基因重组质粒, 对纯培养物和模拟食品样
品直接检测的灵敏度分别为 21 cfu/mL 和 210 cfu/g; 重复性试验表明, 同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为
1 6
0.9%和1.3%; 所制作的标准曲线在2.5 ×10 ～2.5 ×10 拷贝数之间有较好的线性关系, 能对副溶血弧菌进行准确的定量
分析。结果表明, 本研究所建立的副溶血弧菌实时荧光 PCR 检测方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点, 能
进行定量检测, 而且检测时间从核酸抽提到出实验结果仅需要3 h, 是快速检测副溶血弧菌的有效手段。
关键词: 副溶血性弧菌, 实时荧光定量PCR, toxR 基因, TaqMan 探针, 检测
Rapid Detection of Vibrio parahaemolyticus by TaqMan-based
Real-time PCR Assay Targeting the toxR Gene
1 1 1,2 1 2 1
Yiying Qin , Hui Wu , Xinglong Xiao , Xiaoquan Yang , Jingwei Zhang , Yigang Yu ,
and Huifang Li 2
1 College of Light Industry Food, South China University of Technology, Guangzh
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