不同持续时间低氧后运动对大鼠胸腺组织细胞凋亡影响.pdfVIP

摘 要 目的：本研究采用不同持续时间低氧暴露后大鼠进行常氧下中等 强度运动模型(模拟高住低练)，探讨不同持续时间低氧暴露后运动 条件下，观察大鼠胸腺组织细胞形态变化、细胞凋亡小体数目、胸腺 组织分泌的胸腺素及CD30含量的变化、凋亡通路及相关因子蛋白及 mRNA表达的影响，揭示不同持续时间低氧后运动对胸腺细胞凋亡的 影响及其可能作用机制。 方法：60只SD大鼠按体重随机分为6组(10只／组)，即：正常 鼠在坡度为0，速度为25m／min的PT动物跑台上每天运动1h。运动 完后，将B、E组和C、F组依次放入氧浓度为12．5％(相当于海拔4000m) 的低氧舱内8h和12h，共持续4周(5天／周)。最后一次实验结束后 24小时，大鼠腹腔麻醉断头处死，取胸腺组织液氮保存，胸腺组织 匀浆后酶联免疫(ELISA)法检测胸腺组织胸腺素、CD30的水平； 制备胸腺组织石蜡切片，常规HE染色检测胸腺组织细胞形态学的变 化；TUNEL标记法在光镜下观察胸腺组织凋亡；免疫组化法检测大 cell 鼠胸腺组织细胞HIF．1a、B细胞淋巴瘤／白血病癌基因．2(B associated 2，Bcl．2)、Bax(Bel．2x，aax)因子的蛋 lymphoma／leukemia 水平。 结果：(1)组织匀浆胸腺素、CD30含量变化：胸腺素、CD30 含量A组、B组、C组三组之间比较均显示，具有显著性差异(po．05)， 两两比较A组胸腺素、CD30的含量达均低于B组和C组，C组高于 B组，具有显著性差异(po．05)；E组、F组、D组三组比较，胸腺 的趋势；D组、E组、F组胸腺素、CD30含量分别高于A组、B组、 C组，具有显著性差异(Po．05)。 (2)HE染色显示：A组胸腺组织细胞结构完整，胞核较大，核 膜完整。髓质与皮质部未见特殊改变；B组胸腺细胞较A组胸腺细胞 无明显的变化，在皮质部分出现少量的脱落细胞：C组胸腺小体部分 细胞肿胀，核膜部分边缘脱落，在皮质可见较多的脱落细胞；D组胸 腺小体部分扩大，细胞呈扁平，细胞间隙增大；E组胸腺小体扩大， 胸腺小体细胞轻度肿胀，少量核膜有轻度损坏未见脱落；F组胸腺细 胞水肿，以皮质部最为严重，在皮质部可见到细胞核损坏的脱落细胞。 ’ (3)TUNEL染色显示：胸腺细胞凋亡阳性颗粒多发生在皮质和 髓质，少发生在胸腺小体部分。图像分析表明E组、F组、D组三组 凋亡指数之间比较，呈显著性差异(pO．05)，两两比较F组阳性凋亡 ． 组、E组、F组凋亡指数分别高于A组、B组、C组，具有显著性差 异(PO．05)。 (4)免疫组织化学染色石蜡切片观察大鼠胸腺组织HIF．1a的蛋 白表达显示：HIF．1a免疫组织化学阳性物质定位于胞浆内，细胞核内 偶见，核膜阴性，呈弥散或颗粒状主要分布于胸腺组织皮质部分。统 计学分析结果显示： A组、B组、C组三组之间比较，具有显著性 差异(pO．05)，两两比较B组和C组表达均高于A组比较，均具有显 著性差异(po．05)；E组、F组、D组三组比较，具有显著性差异(p O．05)；两两比较F组均高于D组和E组，E组低于D组，均具有 显著性差异(po．05)；D组、E组、F组阳性表达分别高于A组、B 组、C组，具有显著性差异(PO．05)。 (5)免疫组化染色石蜡切片观察大鼠胸腺组织Bcl．2、Bax的阳 性表达显示：bcl．2、Bax免疫组织化学阳性物质定位于胞浆内，偶见 细胞核内，核膜阴性，呈弥散或颗粒状主要分布于胸腺组织皮质部分。 统计学分析结果：Bcl．2、bax的阳性表达均显示A组、B组、C组三 组之间比较，具有显著性差异(pO．05)，两两比较A组阳性表达均低 于B组和C组，C组高于B组，具有显著性差异(pO．05)；D组、 E组、F组阳性表达分别高于A组、B组、C组，具有显著性差异 (PO．05)。 (6)大鼠胸腺组织细胞凋亡与Bax、Bax／bcl．2比值的相关性以 及HIF．1a与Bax表达的相关