在MDCK细胞上高产的乙型流行性感冒病毒株的筛选及其全 - 病毒病所.PDF

第 20 卷 　 第 3 期 病 　　毒 　　学 　　报 Vol . 20 　　No . 3 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2 0 0 4 年 9 月 CHIN ESE J OU RNAL OF V IROL O GY Sept . 　2 0 0 4 在 MDCK 细胞上高产的乙型流行性感冒病毒株 的筛选及其全基因组克隆 齐立 ,吴昆昱 ,李梓 ,张烨 ,董婕 ,张立国 ,张智清 ( 中国疾病预防控制中心 　病毒病预防控制所 　北京 　100052) ( ) 摘要 :流行性感冒 流感 病毒可引起世界范围的大流行 , 因此需要及时地生产流感疫苗来预防流感的流行 。乙型 流感病毒是疫苗的重要组成部分 。传统制备疫苗的方法是使用鸡胚生产 ,存在很多缺陷 ,应用哺乳动物细胞生产 流感疫苗是个更好的选择 。但是 , 乙型流感病毒感染 MDCK 细胞后 ,很难得到持续的高产 。此实验筛选到的乙型 流感病毒在 MDCK 细胞连续传代 15 代后 ,PFU 值从第 1 代的 8 ×104 到第 15 代 2 ×109 , TCID50 从第 1 代 65 到第 15 代的 80 。将筛选到的毒株进行全基因组克隆 ,用两套引物获得乙型流感病毒的全部 8 个节段 。此结果为利用 反向遗传技术将高产毒株与流行毒株重配 ,进而在哺乳动物细胞上生产基因工程流感疫苗打下基础 。 关键词 : 乙型流感病毒 ;高产毒株 ;PFU ;通用引物 ;全基因组克隆 + ( ) 中图分类号 :R373 . 1 3 ;Q78 　　文献标识码 :A 　　文献编号 :1000 - 872 1 2004 03 - 0 195 - 05 ( ) 　　流行性感冒 流感 病毒在世界范围内引起人畜 决的问题是获得高产 的母株 , 然后与流行毒株 的 的发病和死亡 。流感的流行常由甲型和乙型流感病 HA 和 NA 重配 ,使疫苗株既保持高产的特性 ,又具 毒引起 ,因此乙型流感病毒的表面抗原是流感疫苗 有流行毒株抗原性的特点[2 ] 。反向遗传学技术的 的重要组成部分[ 1 ] 。流感病毒 由于抗原转换或抗 发展使快速生产流感疫苗成为可能 。本文的目的即 原漂移常导致新的变异抗原的出现 , 因此疫苗株需 是筛选适合于哺乳动物细胞生产的高产乙型流感病 要经常更换[2 ] 。当前获得批准生产的是鸡胚来源 毒株 。 的灭活疫苗 ,尽管采取了有效的纯化工艺 ,但是仍然 我们通过大量的工作筛选到高产乙型流感病毒 存在着许多不足 。不仅成本昂贵 ,而且鸡胚的残留 株 ,并根据乙型流感病毒基因组的特点 ,设计了通用 物可能引起过敏反应 。更主要的问题是鸡胚来源的 引物 , 进行 了全基 因组克隆。乙型流感病毒根据 病毒在鸡胚连续传代后常常引起 HA 的变异 ,这种 HA 1 区的不 同分为 Yamagat a 系和 Victoria 系 , 在 变异也可能发生在病毒其它节段[3 - 6 ] ,结果使鸡胚 GenBank 中乙型流感病毒的序列远远少于甲型流感 来源的疫苗不能与人群中的流行毒株完全匹配 。应 病毒 。另外 ,许多提交给 GenBank 中的