Flow Jo软件分析细胞周期样品.pdf

构建全球华人科学博客圈 返回首页 RSS订阅 帮助 注册 | 登录 FlowJo中文技术博客 分享 /u/FlowJo 流式细胞技术相关资源分享，流式细胞数据分析，流式技术支持及培训 博客首页 动态 记录 博文 相册 主题 分享 好友 留言板 个人资料 博文 Flow Jo软件分析细胞周期样品 已有 1394 次阅读 2012-3-20 12:20 | 个人分类:FlowJo使用 | 系统分类:科研笔记 | 关键词:FLOWJO软件, 流式数据，细胞周期分析， Flow Jo软件分析细胞周期样品 张千君 作者：胡金涛 加为好友 给我留言 细胞周期的检测是流式细胞仪最为广泛的应用之一。细胞周期是指以有丝分裂方式增殖的细胞从亲代 打个招呼 发送消息 分裂结束到子细胞分裂结束所经历的过程。通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期：细胞开始 RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。S期：DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于 G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质， 直到进入M期。因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞， 这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上同样无法与G1期 区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪 进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤 病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 细胞周期检测的原理： 核酸染料可以与DNA分子特异性的结合，细胞周期检测中PI最为常用。PI为插入性核酸荧光染料，能选择 性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流 式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。 细胞周期示意图如 （图一）所示 （图一） FlowJo分析细胞周期数据的过程 1.  把细胞周期样品拖入FlowJo软件，双击打开原始数据。如(图二)所示： (图二) X轴选择FSC,Y轴选择SSC。分析细胞周期的细胞选择上图所示的细胞群体进行分析。 2.      在SSC/FSC图中双击分析的细胞群体，如 （图三）所示： /blog-349948-549703.html Page 1 / 3 （图三） X轴选择FL3-LIN,用来表示PI的线性信号。Y轴选择FL3-PEAK,用来表示PI的峰值信号。本实验数据采集采 用的是贝克曼仪器采集的数据。 （如果是BD的仪器采集的数据，X轴选择FL2-W,用来表示PI的宽度信 号。Y轴选择FL2-A,用来表示PI的面积信号），如上图所示多倍体或异倍体细胞不予分析。 3.      在FlowJo工作台中选中 “用于周期分析的二倍体细胞”这个结点，在工具栏的 “工具”中选择 “细胞 周期”。 如 （图四）所示 （图四） 说明： 1) 分析的模型有Watson和DJF两种，用户可以选择任意一种进行分析，两模型间没有实质的差别。模式 右边是两种模型的显示方式。