试验六气相色谱-质谱联用法测定蔬菜中有机磷农药残留量.PPT

实验六 气相色谱-质谱联用法测定蔬菜中有机磷农药残留量 中山大学公共卫生学院 肖琴 一、实验目的 了解气相色谱-质谱联用仪的结构和操作方法。 了解蔬菜中农药残留量的气相色谱-质谱联用分析方法。 二、实验原理 气相色谱-质谱联用法(GC-MS)将气相色谱仪作为质谱仪的进样和分离系统，质谱仪作为气相色谱仪的一种特殊检测器，二者通过“接口技术”连接，兼有色谱和质谱的双重优点 1. Scan （全扫描）模式 2. SIM （选择离子监测扫描）模式 三、仪器及试剂 气相色谱-质谱联用仪，自动进样器。 丙酮(分析纯)，毒死蜱标准储备液(纯度均≥99％，100 mg/ml)。 四、实验条件 1. 色谱条件： 色谱柱：DB-5弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 mm)或其它类似商用毛细管柱； 柱温：程序升温，起始温度140 oC，保持2 min，以20 oC/min升至180 oC，以10 oC/min升至225 oC，以20 oC/min升至250 oC ,保持2 min； 进样口温度：250 oC； 载气：He(纯度≥99.999％)，流速1 ml/min； 直接进样1.0 ml。 2. 质谱条件： EI离子源 70 eV； 扫描测定范围50~400 U； 离子源温度200 oC； 接口温度250 oC； 溶剂延迟5 min。 五、实验步骤 1. 农药标准系列溶液配制 临用前用微量移液器准确量取适量的毒死蜱标准储备液，于10 ml容量瓶中，用丙酮稀释至刻度，即成1.0、2.0、5.0 、10 mg/ml的标准系列溶液； 4 oC冰箱贮藏。 2. 仪器启动与条件设定 按所用仪器的操作规程开启质谱仪的真空系统，等待仪器的真空度达到指定要求； 打开计算机电源，启动质谱工作站，设定气相色谱和质谱条件； 待仪器稳定，开始进样分析。 3. 总离子流色谱图和质谱图(Scan模式) 用自动进样器准确吸取1.0 ml 10~50 mg/ml毒死蜱标准溶液，注入气相色谱-质谱仪，得到总离子流色谱图(TIC)以及毒死蜱的质谱图； 获得毒死蜱对应的保留时间； 并将获得的质谱图进行质谱数据库相似度检索。 4. 标准曲线(SIM模式) 用自动进样器准确吸取1.0 ml毒死蜱标准系列溶液，注入气相色谱-质谱仪，得到相应系列的毒死蜱的选择离子流色谱图(SIM) ，以色谱峰面积对标准溶液的浓度作图，建立标准曲线。 5. 模拟样品分析(SIM模式) 用自动进样器准确吸取1.0 ml待测样品溶液，注入气相色谱-质谱仪，在SIM模式下得到选择离子流色谱图； 将获得的特征碎片离子（定性离子）及其丰度比与标准物质比较，进行阳性确证； 获得相应的定量离子的色谱峰峰面积，从标准曲线上查得相应组分的含量。 六、结果记录 1.谱图解析 (1)总离子流色谱图(TIC)及保留时间 (2)毒死蜱的质谱图及特征碎片离子 2.数据记录与处理 (1)标准曲线 (2)样品分析 * * 质谱仪的基本结构 高真空系统 ——接口是关键技术 典型GC-MS的系统示意图 m/z Retention time TIC : Scan 72 54 152 MS 质谱图 全扫描是对指定质量范围内的离子全部扫描并记录 得到的是化合物全谱的正常质谱图 是MS最常用的一种扫描方式 数据采集模式： mass number Time [Scan] ——主要用于定性分析 某样品的总离子色谱图 把采集到的每个质谱的所有离子相加得到总离子强度,总离子强度随时间变化的曲线就是总离子流色谱图 峰面积和该组份含量成正比,可用于定量 总离子流色谱图（TIC） 总离子流图（TIC) 由总离子色谱图可以得到任何一个组分的质谱图 Retention time m/z=72 m/z=152 m/z=54 是质谱仪的另外一种扫描方式 只对选定的离子进行跳跃式扫描得到的色谱图 SIM 模式灵敏度高于 Scan模式 mass number Time [SIM] ——主要用于定量分析 选择离子监测（SIM） 只对选定的离子进行检测,而其它离子不被记录 SIM只能检测有限的几个离子，不能得到完整的质谱图，不能用来进行未知物定性分析 SIM最主要的用途是定量分析 最大优点：选择性好, 灵敏度高 GC-MS定性定量分析 快速、方便的定性方法：利用计算机进行库检索 目前GC-MS应用最为广泛的有NIST库和Willey库，前者目前有标准化合物谱图13万张，后者有近30万张 得到质谱图后可以通过计算机检索对未知化合物进行定性 在利用数据库检索之前,应首先得到一张很好的质谱图 GC-MS定性分析 得到检索结果之后,还应综合考虑才能给出定