二章 菌种选育、保藏与复壮.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 【目的】用来分离单一菌落或用来估计样本中微生物的数目。 * * * * * * * * * * * * 取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL， 加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。 重复此步骤直至所需要的稀释浓度。 从最后稀释菌液中吸取 0.1mL菌液，置入准备好的无菌琼脂内。 将三角玻璃棒浸于酒精中 将三角玻璃棒在火焰上燃烧 （须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧） 使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。 4. 生产性能的测定 一般采用两步法： 初筛：以量为主 复筛：以质为主 二、诱变育种 用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变。 诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质。 诱变剂 物理：紫外线，快中子 化学：硫酸二乙酯，亚硝基胍 { 诱变育种的主要环节 （1）以合适的诱变剂处理细胞悬浮液 ——诱变 （2）用合适的方法淘汰负效应变异株， 选出性能优良的正变异株——筛选 第三节 生产菌种的改良 一、原生质体融合（protoplast fusion） 1.标记菌株的筛选 2.原生质体的制备 3.原生质体的融合与再生 聚乙二醇（PEG）－脱水剂 助融剂 Ca2+－提高融合频率 4.融合子的选择 原生质体，它是细胞进行各类代谢的主要场所，是细胞中重要的部分。原生质体可分为质膜、细胞器、胞基质三部分 二、DNA重组技术 （DNA recombination technology） 目标DNA片断的获得 与载体DNA分子的连接 重组DNA分子引入宿主细胞 从中选出所需重组DNA分子的宿主细胞 第四节 菌种的衰退、复壮与保藏 一、菌种的衰退 衰退的原因： 1.菌种保藏不当 2.菌种生长条件没有得到满足 二、 菌种的复壮 1. 纯种分离 2. 通过寄主体进行复壮 3. 淘汰已衰退的个体 三、菌种保藏 1.原理 低温、干燥、缺氧、缺营养物质 2. 方法 （1）斜面保藏法 （2）干燥保藏法 （3）悬液保藏法 （4）冷冻干燥保藏法 （5）低温保藏法 第五节 种子的扩大培养 一、微生物的培养方法 1.表面培养 2.固体培养 3.液体深层培养 二、菌种的扩大培养 菌种扩大培养的目的： 为每次发酵罐的投料提供相当数量的代谢旺盛的种子。 （一）种子制备的工艺流程 摇瓶 保藏菌种 试管斜面活化 茄瓶斜面 种子罐 固体培养基 摇瓶 种子培养 发酵培养 （二） 斜面菌种的培养 1.不宜多次移种。 2.活化斜面中加0.1%葡萄糖。 培养基特点：原料较精细。 （三）一级种子培养（摇瓶） 培养基特点： 使用的原料基本接近于发酵培养基。 （四）二级种子培养（种子罐） 培养基的特点： 和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，更接近于发酵培养基。 大量地接入培养成熟菌种的优点： 1.可以缩短生长过程的延缓期，因而缩短了发酵 周期，提高了设备利用率。 2.节约了发酵培养的动力消耗。 3.并有利于减少染菌机会。 * * * * 第二章 菌种选育、保藏与复壮 工业常用微生物及要求 工业微生物菌种的选育 生产菌种的改良 菌种的衰退、复壮与保藏 种子的扩大培养 第二章 菌种选育、保藏与复壮 第一节 工业常用微生物及要求 一、常见微生物 （一）细菌（bacteria） 醋酸杆菌属（Acetobacter） 乳杆菌属（Lactobacillus） 芽孢杆菌属（Bacillus） 短杆菌属（Brevibacterium） 棒杆菌属（Corynebacterium） （二）放线菌（actinomyces） 最大的经济价值在于产生多种抗生素（antibiotic） 链霉菌（Streptomyces） 小单孢菌属（Micromonospora） （三）霉菌（mould） 1.曲霉属（Aspergillus） 黑曲霉（A. niger）