奈瑟氏菌表面抗原基因转殖至水稻之研究 - 宜兰大学.PDFVIP

奈瑟氏菌表面抗原基因轉殖至水稻之研究 宜蘭大學生物資源學刊(2008) 4(1): 47-57 奈瑟氏菌表面抗原基因轉殖至水稻之研究 劉芯瑄 1 曾夢蛟 2 楊秋英 2 郭純德 1 尤進欽 1 * 1. 國立宜蘭大學園藝學系 2. 國立中興大學園藝學系及分子生物學研究所 摘 要 奈瑟氏淋病雙球菌(Neisseria gonorrhoeae)是常見的傳染疾病，且仍是全世界主要的問題。成人通常經由性接觸傳 染淋菌。由於抗生素濫用，造成抗藥性淋病增加。因此，利用疫苗抗原選殖至可食用轉殖植物使成為口服性疫苗， 將是一個新興的運送系統。本試驗將分離自奈瑟氏菌表面抗原基因(Ag473)構築以肌動蛋白(actin)啟動子驅動之植物轉 殖載體，並利用農桿菌法轉殖至水稻真核表達系統中表現。本研究的目的為轉殖 Ag473 至水稻系統的建立，及探討 目標蛋白於水稻品種中之表現情形。 本實驗之轉殖材料是以水稻(`台稉 8 號 ´)子葉盤誘導的癒傷組織。將再生的癒傷組織藉由農桿菌轉移後以 kanamycin 初步篩選。轉型存活之再生植株萃取其 RNA 進行 RT-PCR 分析，確定插入水稻染色體的 Ag473 基因正常 轉錄成 mRNA 。再利用Ag473 抗體蛋白進行葉片與種子的西方墨點分析，確認轉殖水稻正確的合成與累積目標蛋白。 Ag473 蛋白之表現量以再生水稻種子進行分析，約佔總可溶性蛋白的 0.36~0.41% 。子代分析上，轉殖再生水稻T1 後 裔進行 RT-PCR 分析，均可檢測到 Ag473 RNA 之訊號，顯示目標基因高度穩定遺傳至後代。因此，本實驗建議水稻 可做為奈瑟氏菌表面抗原(Ag473)基因表達的理想候選者。 關鍵詞：奈瑟氏菌、表面抗原、水稻、食用疫苗 Studies on the Surface Antigenic Gene of Neisseria gonorrhoeae Transferred into Rice (Oryza sativa L.) 1 2 2 1 1,* Hsin-Hsuan Liu Menq-Jiau Tseng Chiou-Ying Yang Chun-Teh Kuo Jinn-Chin Yiu 1. Department of Horticulture, National Ilan University 2. Department of Horticulture and Institute of Molecular Biology, National Chung Hsing University Abstract Neisseria gonorrhoeae is a common infectious disease of humans and has remained a major problem world-wide. N. gonorrhoeae commonly transmits in adults through sex contact. Antibiotic-resistant N. gonorrhoeae highly emerges through the abuse of antibiotic. The cloning of antigen into edible transgenic plants is a promising delivery system for oral vaccines.
The plant nuclear expression vector with overproduction of Ag473 gene driven by actin promo