浒苔中C3及C4途径关键酶的研究.pdfVIP

摘 要 浒苔中C 和C 途径关键酶的研究 3 4 摘 要 2008 年 6 月，黄海海域出现大规模浒苔绿藻，大量浒苔堆积在青岛沿海一 线，对青岛近海的旅游景观和海水养殖业造成了巨大破坏。浒苔绿潮的出现正值 青岛奥帆赛准备期间，绿潮的成因及其潜在的危害效应得到了国内外的普遍关 注。但是，到现在为止，对于浒苔绿潮暴发的原因还没有定论。浒苔能够在短时 间内大规模暴发，说明其有非常有效的光合系统，特别是光合碳同化途径。 光合作用将无机物转化为有机物，同时固定太阳的光能，是地球上最重要的 化学反应。C3 植物中 C4 途径的发现，以及某些 C4 植物的特定发育阶段进行 C3 碳同化方式，说明植物的光合碳同化途径具有极大的可塑性。随着新一代测序技 术的发展，在一些藻类中发现了与 C4 途径相关的基因。在全基因组测序的单细 胞绿藻Ostreococcus tauri 中发现了C 途径中所有的相关基因。通过对海洋硅藻 4 威氏海链藻（Thalassiosira weissflogii ）和三角褐指藻（Phaeodactylum tricornutum ） 的基因组测序，也发现了与C4 光合作用相关的基因。在CO2 浓度降低时，威氏 海链藻（T. weissflogii）的PEPC 的活性会增加。 通过叶绿素荧光仪Dual-PAM-100 测定浒苔在不同条件（干出不同时间、不 同盐度、不同光照强度和不同温度）下PSII 的最大光化学效率（Fv/Fm ）和实际 光化学效率Y （Ⅱ）。在干出、高盐60‰、低盐0‰、强光2000μmol m-2 s-1、高 温35℃等条件下，浒苔的Fv/Fm 和Y （Ⅱ）逐渐降低，表明这些条件可以引起 浒苔的胁迫响应。特别是在干出和强光条件下，浒苔的 Fv/Fm 和 Y （Ⅱ）降低 幅度很大，说明这两个条件可以引起浒苔强烈的胁迫响应。 我们采用454 测序技术，对浒苔（Ulva prolifera ）的转录组进行测序。得到 了445,787 个高质量的read ，占原始序列的88.5% 。通过组装，得到了13,426 个 contig，平均长度为1,000 bp。Contigs 通过进一步组装，得到10,784 个 isotig 。 组装成的Isotigs 的平均长度为1,515 bp。我们将得到的序列与KEGG 数据库进 行比较，发现浒苔的固碳途径中含有C 途径和C 途径所需要的几乎所有酶类。 3 4 根据浒苔转录组测序获得的PPDK 基因的部分序列，设计引物，通过PCR 扩增 I 浒苔中C 和C 途径关键酶的研究 3 4 得到PPDK 基因的部分序列。然后根据PPDK 基因的部分序列进行5’-RACE 和 3’-RACE 反应，最终得到了PPDK 基因cDNA 全长序列。该序列全长为3114 bp， 开放阅读框（ORF ）长度为2700 bp ，编码899 个氨基酸残基，等电点为5.60， 相对分子质量为96.43 KDa，在NCBI 上的登录号为JN936854 。根据浒苔的PPDK 氨基酸序列建立的系统进化树可以看出，在高等植物和藻类中同时存在C 、C -C 3 3 4 和C 物种，说明C 途径的出现是一种多源独立进化。 4 4 通过实时荧光定量 PCR 法对浒苔中 C3 途径和 C4 途径关键酶基因 rbcL 和 PPDK 的研究发现，在浒苔受到