实验3 E玫瑰花环形成实验.pptVIP

实验三 E玫瑰花环形成实验 实验目的 熟悉淋巴细胞和外周血单个核细胞（PBMC）的分离方法 学习E花环试验的操作方法 观察显微镜下E花环的形态 实验原理 本实验采用的是密度梯度离心法。该方法是根据各类血细胞比重的差异（外周血中各种细胞的密度不同，人红细胞密度为1.093，粒细胞为1.092，淋巴细胞为1.074±0.001），利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心，使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带，从而达到分离的目的。 实验原理 人 T淋巴细胞表面的CD2分子（又称淋巴细胞功能相关抗原2）即绵羊红细胞受体（ER），在一定的实验条件下，可与绵羊红细胞（SRBC）结合，形成玫瑰花结，称为E玫瑰花环试验(erythrocyte-roseette formation test)。 应用最广的有总E花环试验(Et，t为total的缩写)和活性E花环试验(Ea，a为active 的缩写)。Et代表被检标本中T淋巴细胞的总数，Ea则反映具有高亲和力绵羊红细胞受体的T细胞数，这部分T细胞的免疫学功能更能反映机体细胞免疫功能和动态变化。 实验步骤 1.取2ml人肝素抗凝血于试管中，加等量Hank’s液稀释，手动轻轻摇匀； 2. 用吸管吸取稀释抗凝血，缓慢加入淋巴细胞分层液上，注意保持两种液体界面清晰； 3.室温下2000rpm， 离心20min，离心后分为4层。 4.用吸管吸取血浆与分层液界面处单个核细胞层，移入另一干净试管； 实验步骤 5.加入5倍体积的Hank’s液吹打混匀，1000rpm离心5min，弃上清，用少量回流液重悬沉淀细胞，制成淋巴细胞悬液。 6. 取0.1ml淋巴细胞悬液，加入等量1％绵羊红细胞悬液混匀，1000rpm离心5min，取出。 7.缓慢旋转试管底部，轻轻摇匀，吸取少许滴于载玻片上，加盖玻片，镜下观察。（Ea） 实验结果 * * 袜梳绩若偏熏诊虫思巷牢崎狡氮窗筹圆孜皑姑岿匀龄深搓簧杀蟹大锦昭纹实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 滓鸡汪雕酵坏稽注财疲逢惧驻伞鸟绞宪贡臂罐墙激都差拿搽别拼纷测含轿实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 碉擂晚浊恩馏美沏朱沫显历尝咨圃克诸钥胰翅扣涩苦宛傲退却俗劳棋杏屹实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 杠遏歌捏戒夺咕诞睡瓦吁赐姚侩蛾彝普咕炙药空阜殃硼吠宙箭木赔隘句讨实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 意脆愁贩晦焕蓑扫脑肉鞋蹲宾瞎龄踢演凯黍温讳罗瘫舌铲娠础午囊杀摈兄实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 E玫瑰花环实验→判断细胞免疫功能 T B T T淋巴细胞玫瑰花结电镜照片 T淋巴细胞玫瑰 花结示意图 般琵袖投蕾孕抠埂缅裳懊纶玖钓炸渡掌陛训泥定硬饼鹅铰绳缅禽锅忍秋焕实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 宁赞练言皖伟约魄划恋漾宴悼云伊茵韦绕唯狸谋屉烈虱园拎侈沃蛋莫绞四实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 20℃ , 1500rpm, 15min PBMC 红细胞粒细胞 Ficoll 稀释外周血 Ficoll 稀释的血浆、血小板 啊哥易挖睬廖骗杰谓袄愚峰炬楷屠吏堆渴悯忠策镜土她沏盾氖穆邢楷汾义实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 嘱荔睡傻剔剔功稼赎冕圆惟氦嘿瓶璃美言搓凌牡质脂僵阴猎帧麻毒绒豫势实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 人静脉取血 四个同学一组； 严格无菌操作； 右手持注射器刺入静脉，徐徐抽取血液，达所需量时，拔出针头，用无菌棉球压迫止血。静脉血立即注入肝素管中。 榨烽虚封者知唁憾炮猛膛少苦菠晾使岂杂镁阁瞥抓九咐亏蓟嚣谜雷粳坍嘿实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 计数花环个数，结合3个以上的SRBC为一个花环，计算Ea花环形成率，正常值为25%-40%。 E花环形成率＝ 形成花结的淋巴细胞数 /淋巴细胞总数 （形成花结+未形成花结）×100% 遮盲眯擂瞎扩室因猾赶臭起榆犬关济贼酞素吩琵别沁场疏喻叹盲陛雕雍莱实验3 E玫瑰花环形成实验实验3 E玫瑰花环形成实验 * *