猪心蛋白提取液溶液.pptVIP

猪心去蛋白提取物原液结构;摘 要;之后用紫外吸收分析法来测定样品的最大吸收波长，若在蛋白质类物质的吸收范围内则可进一步确定了本品的主要组成成分为蛋白质类物质。然后是对样品中多肽含量的定量分析。我们采用双缩尿分析法，通过制作标准曲线和测出样品溶液的吸光值从而计算出样品的多肽含量。此外，我们还要对样品中的主要成分的分子量的大小进行测定。本实验主要应用两种方法以便进行对比。先采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，通过计算本品的组分分子的有效迁移率并制作标准曲线，即可测出各组分分子的分子量大小。另一种方法是用排阻高效液相色谱分析法，通过面积归一法计算峰面积可得出样品主要成分的分子量。 ;关键词;序 言;实验步骤;;实验过程;（2）双缩脲反应 双缩脲反应是将尿素加热，2分子尿素缩合放出1分子氨而形成双缩脲。双缩脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）在碱性溶液中Cu2+结合（4：1）成粉红色的化合物。颜色的深浅与蛋白质含量成正比，故可用于比色法测定蛋白质的含量。[2] 双缩脲反应可用于检查蛋白质的水解程度，当蛋白质水解液不产生双缩脲反应时，可以认为水解液中只有氨基酸和二肽存在，蛋白质的水解是完全的。方法：取本品原液1.5ml，加6%氢氧化钠1.5ml，加双缩脲试液0.15ml，如含有肽结构物质，溶液蓝色应变深。 方法：取本品原液1.5ml，加6%氢氧化钠1.5ml，加双缩脲试液0.15ml，如含有肽结构物质，溶液蓝色应变深。 ;（3）二苯胺反应 二苯胺反应是在酸性条件下，DNA与二苯胺试剂反应产生一种蓝色的复合物，在595nm下具有强烈的吸收。蓝色的化合物的产生是由于脱氧核糖的存在。在酸性溶液中，脱氧核糖转变为ω-羟基-γ-酮基戊醛；后者与二苯胺缩合形成了有色化合物，在580-600nm波长下具有最大的光吸收。DNA分子中含有脱氧核糖，所以也能与二苯胺试剂反应显示出特征的颜色。实验结果表明，在一定的浓度范围内，所成的颜色的深浅与DNA的量之间有线性关系。因此，可以利用比色法测定样品中的DNA的含量。[5] 方法：向试管中加入原液1.0ml，加二苯胺试液1.0ml，沸水浴10分钟，如含有DNA结构的物质，溶液显蓝色。;（4）地衣酚反应 地衣酚反应此反应是用来鉴定RNA的颜色反应。在RNA的提取液中加入地衣酚试剂，沸水浴中煮沸20分钟，产生蓝绿色的化合物。[2]这是因为核糖核酸与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，而后者与3，5-二羟基甲醛（地衣酚）反应呈鲜绿色， 步骤1：取本品原液1.0ml，加地衣酚试液1.0ml，沸水浴20分钟，观察。 步骤2：核酸浓缩法 步骤3：取沉淀溶解，对溶解液再进行地衣酚显色反应，观察颜色变化，如含有RNA结构物质，溶液显鲜绿色。;（5）蒽酮反应 蒽酮反应是一种比较常用的用于对溶液中的糖类物质进行鉴定的颜色反应。当蒽酮与糖类物质发生反应是溶液将呈现出鲜绿色。此反应也可通过比色法对糖进行定性分析。[5] 方法：取原液1.0ml，加蒽酮试液1.0ml，沸水浴10分钟，如含有糖类物质，溶液显蓝绿色。;实验结果 组数 茚三酮 双缩脲 二苯胺 地衣酚（1）地衣酚（2） 蒽酮 第一组 正反应 正反应 负反应 正反应 负反应 极微反应 第二组 正反应 正反应 负反应 正反应 负反应 极微反应 第三组 正反应 正反应 负反应 正反应 负反应 极微反应 ;二、紫外吸收分析;三、样品多肽含量分析;双缩脲标准曲线比色液用量表;制作标准曲线，之后取原液2ml，稀释5倍后，取稀释液1.5ml，可从标准曲线上查得样品浓度。 最终测得样品含量为750μg，吸光值为0.458。用以下公式计算： 多肽含量（μg/ml）=X（μg）×稀释倍数 样品检测液体积 = 750×5/1.5 =2500μg/ml=2.5mg/ml ;最终的坐标曲线如图 ;四、SDS-聚丙烯酰胺电泳分析;蛋白质的分子量与电泳相对迁移率之间的关系是： Mr=K(10-b·Rm) logMr=logK-b·Rm 式中 Rm=样品迁移率/染料迁移率（cm） Mr-蛋白质的分子量； logK-截距； b-斜率； Rm-相对迁移率。 在同一电场中进行电泳，把标准蛋白质的相对迁移率与蛋白质分子量对数作图，由未知蛋白质的