杨月红_进行性肌营养不良症（DMD）基因检测.PPTVIP

* * 医学遗传学实验 进行性肌营养不良症（DMD）基因检测 第三次 实验内容 实验目的： 通过对进行性肌营养不良症基因检的实验，掌握一种简便检测基因缺失突变的方法 实验原理： 通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR），结合琼脂糖凝胶电泳技术，检测进行性肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)致病基因外显子缺失突变。 琼脂糖凝胶电泳技术 DMD是一组原发于肌肉组织的遗传病。DMD基因定位于Xq21.2-21.3之间，全长2450 kb左右，是人体最大的基因，大约占X染色体的1%。有79个外显子组成，编码1个3685个氨基酸、分子量为427 kD的蛋白质-----抗肌营养不良蛋白(dystrophin)，这种蛋白具有稳定细胞膜和细胞内钙调节的功能。 该基因有多种突变形式，60％是外显子缺失突变，5％是重复突变，另35％可能是很小的DNA片段缺失或点突变。通常选择DMD基因中9个缺失热点的外显子扩增，可检出缺失突变中的90%。 DMD基因4个外显子的引物序列 本实验设计为扩增DMD基因中4个外显子，其中外显子45 和48在中国患者中的检出率分别为26%和48%。 实验步骤： 采血 DNA抽提 PCR 电泳 观察结果 实验方法：多重PCR 双蒸水 17.8 ?l 10xBuffer 2.5 ?l MgCl2 2 ?l dNTPs 0.5 ?l Primer R+F (混合) 1.4 ?l DNA 模板 0.5 ?l Taq-DNA聚合酶 0.3 ?l 石蜡油 1滴 10?l PCR产物 混匀 加样 电泳(140V,2hr) 紫外灯下观察 2 ?l 6*loading buffer 实验结果与分析 2. 人类染色体核型分析 ●实验目的： 通过实验掌握染色体核型分析的常用方法以及Ｇ分带的带型特征，初步会识别Ｇ分带人类染色体。 核型 : 将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来构成的图象 实验原理 实验原理 ： 人类染色体Ｇ带 1P33 1q32 人类染色体Ｇ带