一、 前言 - 清华大学生命科学院.doc

研習報告與討論 姓名：邱妮渟 學號：891629 研習地點：北京大學生命科學院 于于龍川教授的實驗室 題目：Oxytocin 對脊髓背角神經元放電活動的影響 1. 摘要： 本實驗主要在探討Oxytocin 對大鼠脊髓腰膨大中背角 WDR神經元放電活動的影響。藉由垂直插入脊髓背角的單管玻璃微電極，可通過計算機記錄放電頻率。將刺激電極插入大鼠一側後肢爪墊皮膚內，引發背角神經元的放電後，再將藥物時直接用pipetman吸取加在背髓背角表面上，觀察加入藥物前後放電頻率的變化。但本實驗的實驗結果並無法說明我們想要探討的主題，原因有兩大點(1)本實驗所測量到的神經元都是自發放電，皆無法由電刺激引起誘發放電。(2)沒有做出自發放電神經元的對照組。在假設對照組的自發放電頻率不會隨著時間改變的情況下，我們可以得到”Oxytocin對大鼠脊髓中背角神經元自發放電活動有抑制的作用”的結論。 2. 背景介紹： Oxytocin是一種神經激素，由9個氨基酸組成，其分子序 列為Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly(NH2)。Oxytocin基因主要表達在下丘腦室旁核和視上核的大細胞中， Oxytocin的受体是G蛋白耦連型受体，通過Gq蛋白至磷脂脢C-β途徑產生作用。 Oxytocin同時在中樞神經系統中有重要的神經遞質和神經調質作用[1]。Oxytocin參與對軀体感覺信息的調節，如傷害性感受與痛覺的傳遞。腦室內注射和腦池內(intracisternal)注射oxytocin，都表明oxytocin有鎮痛作用[2]。 脊髓是感覺信息傳遞過程中的一個重要結構。在脊髓背角中，初級傳入纖維和脊髓背角連絡神經元組成突觸，其中一些脊髓背角神經元發出上行纖維，並與脊髓上結構中的神經元形成突觸連繫，這個上行通路在從外周到腦的感覺信息傳遞起重要作用。脊髓上結構同時對初級感覺信息的傳遞有下行調節作用，激活這些下行調節系統可以增強或抑制脊髓感受信息的傳遞。 有研究表明，室旁核中有含有oxytocin的神經元發出軸突透射至脊髓背角表面[3]，這些纖維的未稍與脊髓背角神經元形成突觸[4]。 由於整体給予oxytocin的研究提示了oxytocin在大腦和脊髓的感覺訊息傳遞過程中具有調節作用，而脊髓中的廣動力範圍神經元(wide-dynamic range neuron, WDR neuron)可以同時感受傷害性和非傷害性刺激。本實驗即藉著測量Oxytocin對電傳入神經或自然刺激所誘發的脊髓中WDR神經元放電頻率的影響，可以了解Oxytocin對傷害性感受在脊髓中的調節作用。 2. 材料與方法 2.1 藥品： Oxytocin: Poly Peptide Lab, A/S, Hillerod Denmark出品； 用生理食鹽水調至 0.5 nmol / 10 μl。 pentobarbital sodium: 上海化學試劑採購供應站分裝商出品； 用蒸餾水配製為5mg/ml。 Gallamine triethiodide: Sigma Chemical. Co., MO63178 USA出 品；用蒸餾水配製為 10mg/ml。 2.2實驗動物： 實驗采用Spraque-Dawley雄性大鼠，體重300 – 350g，pentobartital sodium{注射量為：1ml/100g重的大鼠}腹腔注射麻醉下進行氣管插管(3.3)及脊髓暴露手術(3.4)，手術完成後，用gallamine triethiodied{注射維持量為：2ml/每小時}制動，後進行人工呼吸(90次/分鐘，潮氣量：5-6毫升)。 2.3氣管插管手術： 將麻醉的大鼠腹面向上固定，沿頸部正中線剪開皮膚，將氣管上方的肌肉向兩側撕開，露出氣管之後，在甲狀軟骨下1cm左右沿C形軟骨環切開氣管1/2周長，將氣管插管插入，並用棉線綁緊固定。 2.4 脊髓暴露手術： 氣管插管手術完成後，將大鼠背面向上固定，在T12(第12節胸椎，也是最後一節胸椎)-L4(第四節腰椎)脊椎骨區域沿背正中間線剪開大鼠皮膚，並沿T12-L4椎骨棘突根部剪斷兩側肌肉，暴露出T12-L4椎骨表面，用骨剪將L1-L3段的脊椎骨椎板去除，再用針挑起並剪去硬脊膜及蛛網膜，暴露出脊髓腰膨大的背側表面後，將0. 9M的生理食鹽水滴在脊髓表面，以保持脊髓的濕潤，再將大鼠移入屏蔽櫥內，腹腔注射gallamine triethiodied制動，接通人工呼吸裝置，用脊髓固定器固定L1-L3段脊椎骨，使大鼠胸廓懸空，以減少呼吸對電生理記錄產生的影響。 2.5 脊髓背角神經元的放電記錄和神經元類型的判定：