酿酒葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立.PDF

果 树 学 报 2017，34（5）：632-638 JournalofFruitScience DOI:10.13925/ki.gsxb 酿酒葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立 * 苏 静，陈佰鸿，毛 娟，左存武，胡紫璟，王 凯 （甘肃农业大学园艺学院，兰州 730070） 摘 要：【目的】建立快速、灵敏的葡萄病毒多重RT-PCR检测体系。【方法】通过设计6对不同引物，在退火温度分别为 48.0、49.0、50.0、51.0、52.0、53.0、54.0、55.0、56.0、57.0、58.0、59.0和60.0℃，采用单一RT-PCR技术检测酿酒葡萄6种常 见的葡萄病毒，即葡萄病毒A （GrapevinevirusA，GVA）、葡萄斑点病毒（Grapevinefleckvirus，GFKV）、葡萄扇叶病毒 （Grapevinefanleafvirus，GFLV）、葡萄卷叶病毒1（Grapevineleafrollassociatedvirus-1，GLRaV-1）、葡萄卷叶病毒2 （Grapevineleafrollassociatedvirus-1，GLRaV-2）和葡萄卷叶病毒4（Grapevineleafrollassociatedvirus-4，GLRaV-4）。在 此基础上，对退火温度相似、扩增片段长度不同的引物进行组合，建立能同时检测2种或2种以上病毒的多重RT-PCR 检测体系。【结果】单一RT-PCR结果显示，退火温度为49℃、55℃和60℃时，可分别检测GVA和GLRaV、GLRaV和 GFKV以及GFLV和GLRaV。多重RT-PCR结果显示，退火温度分别为49℃和55℃时，引物GVA和GLRaV-2以及引 物GLRaV-1和GFKV组合所建立的2个多重RT-PCR检测体系可同时检测葡萄叶片中GVA和GLRaV以及GLRaV和 GFKV。所检测的河西地区16份样品普遍携带葡萄病毒，部分葡萄样品同时携带两种病毒。其中，5份样品为GVA阳 性，8份为GLRaV-1阳性，3份为GLRaV-2阳性，5份为GFKV阳性，所有样品均未检测到GFLV和GLRaV-4。退火温 度分别为49℃和55℃时所建立的GVA和GLRaV以及GLRaV和GFKV两个多重PCR扩增体系检测结果与各样品单 一PCR检测结果均一致。【结论】建立2套多重PCR检测体系，可同时有效地检测GVA和GLRaV-2或GLRaV-1和 GFKV，可用于田间葡萄样品的快速检测。 关键词：酿酒葡萄；病毒；检测；多重RT-PCR 中图分类号：S663.1 文献标志码：A 文章编号：1009-9980(2017)05-0632-07 EstablishmentofmultipleRT-PCRdetectionsystemforfourvirusinthe cultivarsofwinegrape SUJing,CHENBaihong,MAOJuan,ZUOCunwu,HUZijing,WANGKai* (CollegeofHorticulture,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,Gansu,China) Abstract: 【Objective】Grapeisoneofthemostimportantfruitcropsintheworld.Mostgrapeproduction isforwinemaking.Grapecultivarsareuasuallyvegetivelypropagated.HexiofGansuprovincehavebe⁃ comealargeregionforplantinggrapeforwine.Virusdiseaseshavespreadwidelyalongwiththeenlarge⁃ mentofplantingarea.Thereare 6 kindsofvirusofgrapeinChina,including GrapevinevirusA (GVA), Grapevineleafroll-associatedvirus 1 (GLRa