过氧化氢酶（Catalase,CAT）试剂盒说明书.PDFVIP

上海信帆生物技术有限公司 过氧化氢酶（Catalase ，CAT）试剂盒说明书 微量法 100 管/96 样 测定意义： CAT(EC )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H O 清除酶， 2 2 在活性氧清除系统中具有重要作用。 测定原理： H O 在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H O ，使反应溶液240nm 下的吸光度随反 2 2 2 2 应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板 （UV 板）、 研钵、冰和蒸馏水 试剂组成和配制： 提取液：液体 100mL×1 瓶，4 ℃保存； 试剂一： 液体30mL×1 瓶，4 ℃保存； 试剂二：液体 125μL×1 瓶，4 ℃保存。 粗酶液提取： 1、细 菌、细胞或组织样品的制备 收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液， 超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20 ％或200W ，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。 称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4 ℃离心10min，取上清，置 冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。 测定步骤： 1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。 2 、CAT 检测工作液的配制：用时在试剂二中加入25mL 试剂一，充分混匀，作为工作液。 3、测定前将CAT 检测工作液在37℃ （哺乳动物）或25℃ （其它物种）水浴10min 以上。 4、在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 样本和190μL 工作液，立即混匀并计时，记录 240nm 下初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2 。计算ΔA ＝A1-A2 。 CAT 活性计算： a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、血清（浆）CAT 活力的计算: 单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H O 降解定义为一个酶活力单位。 2 2 9 CAT(U/mL)= [ΔA×V反总÷ （ε×d）×10 ]÷V 样÷T=459×ΔA 2、组织、细菌或细胞中CAT 活力计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化1nmol H O 降解定义为一个酶活力单位。 2 2 9 CAT(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷ （ε×d）×10 ]÷(V 样×Cpr) ÷T=459×ΔA÷Cpr （2 ）按样本鲜重计算： 单位的定义：每g 组织每分钟催化1nmol H O 降解定义为一个酶活力单位。 2 2 9 CAT(U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ （ε×d）×10 ]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=459×ΔA÷W （3 ） 按细菌或细胞密度计算： 订购电话：021 传真：021 上海信帆生物技术有限公司 单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H O 降解定义为一个酶活力单位。 2 2 4