不同方法检测乙肝病毒血清学标志物比较及其临床意义.doc

不同方法检测乙肝病毒血清学标志物比较及其临床意义【摘 要】目的：探讨时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)定量检测乙型肝炎血清学标志物(HBVM)与酶联免疫吸附试验(ELISA)定性检测HBV-M的关系及其临床意义。方法：采用TRFIA和ELISA法分别检测86份血清标本HBV-M。结果：两种方法检出率有较高的一致性，但TRFIA检出率明显高于ELISA。结论：TRFIA检测HBV-M比ELISA法敏感，值得在临床实验室推广应用。 【关键词】乙型肝炎病毒 血清学标志物 时间分辨荧光免疫测定法 酶联免疫吸附试验 乙型病毒性肝炎(乙肝)是目前流行最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一。乙肝血清学标记物(HBv)检查仍作为目前临床诊断、治疗和判断乙肝病毒感染者病程及传染性的重要指标之一。HBV血清标志物(HBV-M)的检测是目前诊断乙型肝炎(乙肝)最常用的指标，其检测方法有很多种。临床常用的免疫检测方法主要有放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)。随着科技的发展，一些新的检测技术不断被开发。时间分辨荧光免疫分析法(time resolved fluoroimmunometric assay，TRF IA)的研究在国内外广为重视，其在临床检验中的应用日益广泛，特别在免疫分析方面更显示出突出的优越性[1]。本文探讨了酶联免疫吸附试验(ELISA)与时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)检测HBVM的差异以及其在床价值，现报道如下： 1 资料与方法 1.1 一般资料。所有病例均为2007年2月~2008年1月本院住院或门诊疑为乙肝患者，共86例，其中男42例，女44例，年龄5~58岁，平均(29.2±18.7)岁。采静脉血分离血清置-70℃保存。 1.2 试剂与方法。上海新波生物技术有限公司生产的HBsAg，抗-HBs，HBeAg，抗-HBe和抗-HBC定量检测试剂盒，批号上海荣盛有限公司生产的ELISA法定性试剂盒，批号卫生部临检中心提供的乙肝病毒血清学标志物质控品，批其操作和结果判读均严格按照说明书和作业指导书的规定进行。对ELISA与TRFlA两法定性结果不符者，均进行双孔复查。双孔复查均阳性者定为阳性结果。 1.3 仪器。Anytest2000型时间分辨荧光免疫分析仪，DYN EX2MRX型酶标仪。 1.4 结果判定。ELISA法定性结果参照试剂说明书中的判定方法，经过本室严格检测，TRFIA的不同浓度标准品对应ELISA法定性检测的结果为：以HBsAg≥1.0ng/ml，抗-HBs≥10mu/ml，HBeAg≥0.5NCU/ml，抗-HBe≥4.0NCU/ml，抗-HBc≥0.6NCU/ml判定为阳性，反之为阴性。 1.5 统计学处理。所有数据经SPSS110软件统计分析，方法学间数据比较用x2检验。 2 结 果 TRFIA法和ELIsA法检测HBVM结果比较。86例血清标本中，除抗-HBe检测结果TRFIA法和ELIsA法差异有显著性(P0.05)，具体见表。 3 讨 论 乙肝是一种全球广泛流行的传染病，以HBV感染数和HBsAg携带率估算，全世界HBsAg带毒者有3.5亿人，其中亚、非、拉地区有2.8 亿，而中国就有1.2亿人，占全世界HBsAg携带者的1/3，占亚、非地区的1/2[2]。加强对乙肝的防制是保障我国人民健康、促进经济发展和社会进步的重要措施。因此，筛查正常人群，对健康人群进行计划免疫，需要一种快速、准确、灵敏、简便的检测方法，过筛无偿献血.人员、从业人员体检及婚检，临床上作病程进展的评估及疗效评价等。传统的ELISA方法对乙肝两对半血清标志物定性测定，只能判断其阴阳性，无法得知其真正的浓度，给临床诊断和治疗带来许多不便。而HBV血清标志物定量检测能较为准确地反映其血清中的含量，可以间接反映体内HBV复制活跃程度，对临床药物疗效评价具有重要意义[3]。两对半定量检测结果的有效性在检测的过程中直接进行了标准量化质控，分高中低及三个定值质控品，两对半定性检测的室内质控，ELSA只能间接进行质控，分阴阳性质控品，免疫胶体金检测则不能进行严格的室内质控，从而来保证检测结果的有效性和溯源性。 TRFIA法检测的灵敏度明显高于ELISA法，这与其检测原理有关。TRFIA主要应用的是镧系元素的特点：原子标记技术，用镧系元素“铕”作为示踪物，标记物体积小，对被标记物的空间结构和活性影响小；时间分辨标记物“铕”的荧光寿命长，延缓测草时间等待测样品中的自然荧光完全淬灭后，再测定“铕”的荧光信号，这样就能消除非特异性荧光的干扰，提高了检测灵敏性；波长分辨，镧系元素的发射光和激发光波长间stok