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试 验 抗日本血吸虫卵黄抗体的制备与鉴定
材料与方法
1.1主要试剂
天津市弗晨化学试剂厂 批号200101（分析纯）
硫酸铵 天津市四通化工厂（分析纯）
3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB） Amresco批号T2007/10
二甲基亚砜（DMSO） 郑州化学试剂厂 批十二烷基磺酸（SDS） 北京鼎国生物技术公司 Sigma进口分装 L5750
丙烯酰胺 沃德赛斯生物技术有限公司Sigma进口分装A8887
羊抗鸡IgY（FITC标记） romega公司
低分子量标准蛋白质 中科院上海生物化学研究所
DAB Amresco C069
DTT Genview DH116-2
1.2 试剂的配制
1.2.1 提取蛋白用试剂的配制
（1）饱和硫酸铵溶液
(NH4)2SO4 760g，
蒸馏水（50～80℃） 1000mL
搅拌溶解20分钟，趁热过滤冷却后以浓氨水（NH3·H2O）调PH至7.0～7.4，配制好的饱和硫酸铵置4℃处置30 min以上，瓶底应有结晶析出，用时应置室温平衡后再用。
（2）醋酸缓冲液（0.06M,pH4.8）
醋酸钠 4.082g
冰乙酸 1.815g（约1.7 mL ）
1.2. ELISA用试剂
（1）包被液（0.05M pH9.6 碳酸钠缓冲液）
无水Na2CO3 1.59g
NaHCO3 2.93g蒸馏水加至1000 mL
（2）洗涤液（0.01M pH7.4 磷酸盐缓冲液）PBST
NaCL 8.0g
KCL 0.2g
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4?12H2O 2.9g
吐温-20 0.5mL蒸馏水加至1000 mL
（3）封闭液（1% BSA－PBST）
牛血清白蛋白（BSA） 1g
洗涤液 PBST 100mL
（4）底物缓冲液（pH5.0 柠檬酸-磷酸缓冲液）
0.1M柠檬酸 (19.2g/L) 24.3mL
0.2M Na2HPO4 (28.4g/L) 25.7mL
蒸馏水 50mL
（5）TMB底物使用液
TMB储存液（100mg溶于
10mLDMSO,4℃保存） 100μL
底物缓冲液 10mL
30%H2O2 10μL （临用新鲜配制）
（6）终止液（2M H2SO4）
H2SO4（96%） 22.2mL
蒸馏水 177.8mL
1.2. SDS电泳用试剂
(1)10%（w/v）SDS溶液
十二烷基硫酸钠（SDS） 10g
蒸馏水 100mL （室温保存）
(2)10%（w/v）过硫酸铵（AP）
过硫酸铵 1g
蒸馏水 10mL （临用前新鲜配制, 4℃保存＜1周）
（3）30%丙烯酰胺混合液
丙烯酰胺 29.2g
二甲基双丙烯酰胺 0.8g蒸馏水定容至100mL，棕色瓶4℃贮存
（4）分离胶缓冲液（1.5M pH8.8Tris-HCl）
Tris 18.2g
少量蒸馏水溶
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