临床生物化学试验室基本技术与管理.DOC

PAGE  PAGE 47 第二章 临床生物化学实验室基本技术与管理 实验室的基本技术与管理是临床生物化学检验工作的重要基础。本章所涉及的实验室基本技术与管理主要是应用于临床生物化学检测的分析技术与质量管理，目的在于加强基础，提高生物化学检验的质量。对于实验室的其他基本知识，基本技术以及实验室的管理方法，可参阅其他相关教材。 第一节 常用临床生物化学分析技术 临床生物化学分析技术很多，常用的主要有光谱分析技术、电泳技术、离心技术、层析技术、电化学分析技术等。 一、光谱分析技术 利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术，称为光谱分析技术。根据光谱谱系的特征不同，可把光谱分析技术分为发射光谱分析、吸收光谱分析和散射光谱分析三大类。在临床生物化学检验中，光谱分析是一类十分重要的技术，应用极为广泛。 分光光度法(spectrophotometry) I. 光谱分析法(photometry) 1. 定义：根据物质吸收、发射或散射辐射能而建立起来的一类分析方法。 2. 光的基本性质：高速传播的电磁辐射； 具有波动性(?=c/v)和微粒性(E=hv)； 短波能量大，长波能量小 3. 物质对光吸收的基本原理： 能量转移当光辐射通过某种物质时，组成该物质的分子与光子发生“碰撞”，光子的能量就转移至分子、原子上，使它们由基态(低能态)跃迁到激发态(高能态)，这种跃迁称为激发。 选择吸收组成物质的分子仅吸收与其内能变化(基态与激发态能量差)相对应的波长或频率的光，所得到的光谱称为吸收光谱。 发 e.g., 射 荧 光 光 谱 吸 收 激 光 发 谱 激发态(E1) 能量释放处于较高能态的分子(激发态分子)不稳定，当其返回基态时，以热或发射光谱的形式将能量释放出来。所发射出的相应光谱，称分子发射光谱。 ?E=E1-E2=hv 基态(E0) 4. 分类 (1) 吸收光谱分析法：根据溶液能吸收由光源发出的某些 可见、紫外分光光度法(visible and ultraviolet spectrophotometry) * 原子吸收光谱法(atomic absorption spectrophotometry)：微量金属元素 红外分光光度法 波长的光后所形成的特征光谱来鉴定该物质的性质和含量的方法。 (2) 发射光谱分析法：根据物质受到热能或电能等的激发 火焰发射光谱法(flame emission photometry)：碱金属/碱土金属元素 荧光光谱法(fluorometry)：少量无机物、酶活力、激素等 后所发射出的特征光谱来进行定性及定量分析的一种方法。 (3) 比浊/散射光谱分析法：测定光线通过溶液混悬颗粒后 的光吸收或光散射程度的一类定量方法。 比浊法(turbidimetry)：在光源的光路方向上测定透射光强度(透射光散射光)与入射光强度的比值和胶体溶液中质点浓度间的关系。 散射测浊法(nephelometry)：在光路的垂直方向上测量散射光强度和胶体溶液中质点间的关系。 特点：灵敏度高；测定简便、快速；试样不被 破坏等。 II. 可见、紫外分光光度法 定义：根据物质分子对于200nm~700nm光区 电磁辐射的吸收特性进行分析的方法。 可见光：400~700nm,有色物质溶液 紫外光：200~400nm,无色物质 特点：灵敏度高(10-4~10-7g/ml); 选择性强； 精确度和准确度高； 仪器设备简单，操作易掌握 吸收光谱 光谱的产生：化合物分子的价电子跃迁 吸收光谱曲线：电子跃迁的吸收波长和吸收强度可用仪器测定，在可见、紫外光区内绘制或扫描得到一条以波长(?)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标的吸收曲线。 光吸收的基本定律(Lamber-Beer’s Law) (1) 定律：单色光通过吸光溶液后，吸光度与浓度或厚度之间呈正比关系。 Lamber定律：说明吸收与厚度间的关系 Beer定律：说明吸收与浓度间的关系 (2) 表达式： -lgIt/Io=a?b?c *??It/Io为透光率(transmittance, T) (%) ? A=-lgT= a?b?c * ??A为吸光度(aborbance) *a为吸光系数(absorptivity),即吸光物质在单位浓度及单位厚度时的吸光度。 b为液层厚度 c为溶液浓度(concentration) 比色法(colorimetry) 定义：用可见光作光源，比较溶液的颜色深浅度以测定所含有色物质浓度的方法 所用仪器：分光光度计(spectrophotometer)