miR-92a含量检测试剂盒（荧光RT-PCR法）说明书.PDFVIP

miR-92a 含量检测试剂盒（荧光RT-PCR 法）说明书 【产品名称】 1 样本采集： 通用名称：miR-92a 含量检测试剂盒（荧光RT-PCR 法） 1.1 大便须排入一个干净的容器中，避免与水、尿液混合； 【包装规格】 48 份/盒 1.2 小心打开采样容器，用附在采样容器盖上的小匙来刮取适量粪便 表面样本，去除明显食物残渣，避免样本粘附于容器外壁； 【预期用途】 1.3 样本采集后若不能立即检测，可置于-80 ℃保存，保存期为8 个月。 miR-92a来自人类13号染色体上的miR-17-92基因簇，是一类小分子 非编码RNA，在大肠癌发展中有促进作用，它通过靶向抑制PTEN 、KLF4 1.4 在粪便表面刮取粪便样本作为待检测样本。 和下游的p21基因来促进大肠癌细胞的增殖和迁移，在大肠癌患者粪便样 2 RNA 提取 本中miR-92a含量增高，可作为大肠癌标志物。 2.1 取0.3-0.5 g 的粪便样本到一新的2 mL 离心管中； 本试剂盒用于人粪便样本中的miR-92a含量测定，对临床医师建议做 2.2 加入0.9 ml Buffer A ，漩涡震荡1min 使样品均匀分布，室温静置 肠镜检测，但因病人依从性差或其它医学原因无法做肠镜检测的患者进行 8min ； 大肠癌的辅助诊断，不能作为肿瘤早期诊断或确诊的依据，不宜用于普通 2.3 13000 rpm ，4°C 离心2 min 后，吸取0.5ml 上清液转移到另一新的 人群的肿瘤筛查，仅作为辅助诊断供临床医师参考。 离心管中； 【检验原理】 2.4 加入0.5 ml Buffer B，震荡10s 混匀，室温静置8 min ；然后加入 0.2ml 氯仿激烈振荡10s，静置10min ； miR-92a 含量检测试剂盒（荧光RT-PCR 法）是采用RNA 提取试剂 2.5 13000 rpm ，4 °C，离心10 min 后；吸取上清液0.6ml 至新的离 盒提取粪便中的RNA ，将提取的RNA 稀释到6 ng/μL 后进行RT-PCR 心管中待用。 反应，反应中的引物探针能够与miR-92a 特异性结合并进行扩增，在扩 2.6 .在96 孔板第一列孔中加入500 μl 无水乙醇、40 μl Beads A 及280 增过程中探针与含miR-92a 的模板链互补结合并释放荧光信号，被检测 μl 步骤 1.5 中的上清液（如果上清液不足，补加PBS 至280 μl ）， 到的荧光信号强弱可以反映起始miR-92a 的含量，根据样本中miR-92a 并记录样本孔位。 含量高低辅助判定受试者是否患大肠癌。