真核微生物的基因重组.PPT

第四章 微生物生长繁殖与遗传变异 第一节 微生物生长的测定 Measurement of cell growth Total cell count (direct observation under microscope) Viable count (plate count or colony count) Spread plate method Pour plate method The plates required to have between 30 and 300 colonies. 一、直接计数法：总菌数法（死菌+活菌） 1．血球计数板计数法 2．电子自动计数器计数法 3．比浊法 4．滤膜法： 二、间接计数法：活菌法 1．平板计数法：广泛用于各种样品的检测 方法：（1）涂布法（菌长在表面） （2）混菌法（菌长在表面和基内）优点： 缺点： Viable count: Spread plate methodand Pour plate method Three basic steps: Dilution, Plating Incubation Viable Count: Dilution Viable Count: Plating Incubation (and counting) The Streak Plate Technique: to obtain a pure clone Petri Disk Cultivation of a Pure Strain 2．液体法（试管稀释法）： 将待测样品做系列稀释，培养后，根据没生长的最低稀释度和出现生长的最高稀释度，查最大可能数表，计算出样品单位体积中细胞的近似值。 3．微菌落法： 一定体积的菌液+半固体培养基滴加在无菌玻片上，培养2-4小时，显微镜下计数片上的微菌落数。 三、霉菌生长的测定 1、平皿的测定 2、U形管培养法 四、生物量的测定 1．菌体干重法： 2．菌体含N量测定法：凯氏定氮法 总Pro量 = 总N量%× 6.25 3. DNA法： 利用DNA可与3，6—二氨基苯甲酸—盐酸溶液（2%）显示特殊荧光反应的原理而设计. 每个细菌细胞平均含DNA 8.4×105ng 4. 生理指标测定法：即微生物分析法 第二节 微生物的生长 The Growth Cycle of Populations Lag phase Exponential phase Stationary phase Death phase The Growth Cycle of Populations （一）延滞期（迟缓期，停滞期，lag phase） 1.现象： 2.原因： 3.细胞特点: 4.此期长短： 与菌种遗传特性、菌龄、接种量、培养条件有关。 5.意义： 在实际工作中，缩短lag phase 的措施： 1）加大接种量 2）先用对数期的种子 3）调整培养基成分，使种子培养基含有发酵培养基的成分 4）选用繁殖快的菌种 （二）对数期(指数期，log phase) 1. 现象： 2.细胞特点： ２．代时（世代时间Ｇeneration time, G）： 单个细胞完成一次分裂所需要的时间 (三)稳定期（stationary phase): 2. 特点: 3.出现原因： 4. 意义： （四）衰亡期 1.现象： 2. 特点： （一）恒浊培养 （二）恒化培养 概念：以恒定流速使营养物质浓度恒定而保持细菌生长速率恒定的方法。 原理： 特点： How to maintain Exponential Growth? 连续培养的优点 1、缩短发酵周期，提高设备的利用率； 2、便于自控。降低动力消耗及劳动强度； 3、产品均一； 三、同步生长： 同步生长：通过培养，使微生物细胞都处于细胞分裂的相同阶段。 获得同步生长的方法： 1. 机械法— 收集同样大小的细胞 密度梯度离心： 选择性滤膜法: 2. 调整生理条件法： 温度、光、限制因子等 ３. 抑制ＤＮＡ生长法： 四、微生物的培养方法 根据微生物对氧需求量的不同分为： 好氧菌、 微好氧菌、 兼性厌氧菌 、 厌氧菌、 耐氧菌。 Aerobic, anaerobic, facultative, micro-aerophilic and aerotolerant anaerobe growth A small amount of agar has been added to keep the liquid from becoming disturbed