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苦瓜蛋白MAP30的抗菌作用及PTD-MAP30跨克氏原螯虾肠膜功能的研究
兰Q!!生笙!Q鲞蔓!Q塑 生塑堂适塑 43
跨克氏原螯虾肠膜功能的研究
王美娜 潘 娟 王 楠 孟小林+
(武汉大学病毒学国家重点实验室 湖北武汉430072)
摘要
IPTG条件下诱
导．表达产物经SDs—PAGE和westemblot检测显示有与预期大小相符合的蛋白，并用Ni2+一
柱纯化目的蛋白。抑茵圈实验发现MAP30蛋白对弧茵敏感性较高，MTT法测得最小抑制浓度
h左右
明TAT—MAP30蛋白可以快速穿过克氏原螯虾的肠上皮细胞并进入到血淋巴中，在1
检测到的蛋白量最多．而且维持时间可以达到6h。
关键词MAP30PTD一蛋白转导结构域抗茵活性
中国图书分类号：Q78 文献标识码：B
苦瓜不仅是一种食用蔬菜，还具有一定的药用
价值口]。苦瓜的粗提液、果汁、叶汁等是苦瓜药用活 制性内切酶购自NEB公司，T4DNA连接酶、蛋白
性的主要成分，具有抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、治疗 Agamse
糖尿病等多种作用[2]。核糖体失活蛋白是一种有效
的蛋白质合成抑制剂[3]，可以使哺乳动物的核糖体 Proteintech
吐酞五)，商品种虾，健康未感染任何疾病。
60S亚基失活，中止蛋白质合成的延伸[4]，甚至可以
1．2重组克隆菌株的构建
使其他动物、植物和细菌的核糖体失活[51。MAP30
是一种I型核糖体失活蛋白，最早从苦瓜种子中分 1．2．1
离得到[6]，具有抗HIV、抗HBV、抗肿瘤多种生物学
活性¨’7]。m跨膜转导结构域是来源于人类免疫 序列，去掉信号肽并加入ATG起始密码子，委托
缺陷病毒(HIV)后期转录的调控子蛋白PI’D的一genemy公司合成。
段碱性氨基酸肽段[8]，具有穿膜活性，能将与之共
价连接的核酸、多肽、蛋白等生物大分子，高效而快 AC’ITllCGAT兀’GTC：
速地转导人细胞或组织内部，并对细胞无毒副作
用旧]，在药物转运和疾病治疗等领域应用潜力巨大。 TCCCCAAG。
弧菌是克氏原螯虾养殖中的重要致病细菌，大规模 设计融合PCR引物：
爆发会给水产养殖带来巨大的经济损失‘10]。本实验
CGACTGCCACT：
主要研究了MAP20蛋白的抗菌活性，以及胛D—
MAP30蛋白的跨膜活性，以期获得一种新的抗菌
蛋白，通过口服方式给药以应用于水产养殖。 CGT：
1材料与方法
1．1 AATrCACAACAG。
实验材料 E．c础JMl09菌株，E．c以BL21
以合成的基因为模板，PCR扩增目的基因，
(DE3)菌株，PErI28a(+)质粒，溶藻弧菌均由实验室
}通信作者
万方数据
44 生物学通报 2015年第50卷第lO期
PCR反应条件：94℃5
IIlin；94℃30s，57℃30s， 时间建立生长抑制曲线。
68℃30 1．5
s(32cycles)；68℃10IIlin。取10仙L PTD—MAP30重组蛋白在克氏原螯虾体内穿
肠情况研究将体重约为40
PCR产物作1％琼脂糖凝胶电泳，
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