三倍体鱼干扰素的克隆和功能的初步研究.pdfVIP

分类号 密级 学校代码 10542 学号—20—12021璺!至鲤 三倍体鱼干扰素的克隆及功能的初步研究 FishInterferonsAnd CloningTriploid OnTheirFunctions PreliminaryStudy 指导教师姓名、职称 塑渣塾撞 研 究 方 向G．蛋白受体信号通道与人类疾病 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年五月 万方数据 摘要 免疫分天然免疫与获得性免疫。天然免疫是机体在种系发育和进 化过程中形成的天然免疫防御功能，即出生后就已具备的非特异性防 御功能；适应性免疫指出生后通过与抗原物质接触所产生的一系列防 御功能。鱼类免疫系统包括天然免疫和获得性免疫系统，是同时具有 两种免疫系统的最低等的脊椎动物。鱼类免疫系统处于天然免疫和获 得性免疫的进化的交汇点上，其中天然免疫对于鱼类抗病而言具有更 重要的意义。 干扰素(IFN)是鱼类及高等脊椎动物天然免疫系统的重要组成 部分，为一类诱导表达的、具有抗病毒功能的细胞因子。根据干扰素 受体及其结合受体后引起的宿主免疫反应，鱼类干扰素可以分为两 类：I型干扰素及II型干扰素(又名IFN-y)。鱼类I型干扰素基因由5 单位。II型干扰素基因具有四个外显子和三个内含子，其受体包含两 个亚单位：IFN．yRl和IFN-yR2。 本研究克隆了三倍体湘云鲫两个IFN基因的eDNA全长序列， 并初步探讨了该两种IFN基因的功能。本论文的研究内容及结果如 下： 1．3n烈a基因eDNA全长740bp，其中编码区长度为552bp，5UTR 为2169。1，理论等电点为9．35。 T 万方数据 2．3nlFNb基因eDNA全长715bp，其中编码区长度为552bp，5’UTR 的长度为52bp，3UTR长度为11 编码183个氨基酸。通过ExPASy分析3nIFNb基因的氨基酸序列， 其分子量为2162．1，理论等电点为9．65。 科鱼类IFN亲缘关系较近，与哺乳动物的IFN亲缘关系较远。 这两种表达重组质粒通过磷酸钙转染法导入HEK293T细胞，Wester n 且其蛋白分子大小在1 a的蛋白是一种分泌蛋白。 这两种表达重组质粒通过磷酸钙转染法导入HEK293T细胞，Wester n 内表达蛋白。 Ⅱ 万方数据 F对 HA质粒通过磷酸钙转染法导入HEK293T细胞，采用PNGase 其全细胞蛋白进行酶切，并结合Western 糖基化修饰，而3nlFNa．HA没有糖基化修饰。 HEK293T细胞，采用PNGaseF对其全细胞蛋白酶切，并结合Westem 饰，说明3nlFNb蛋白具有糖基化修饰。 综上所述，本论文克隆了三倍体湘云鲫的两种IFN基因的eDNA， 并对三倍体鱼的IFNa和IFNb基因的表达及蛋白糖基化修饰做了初 步研究。本论文为将来系统研究IFN在三倍体鱼天然免疫抗病中的功 能打下了基础。 关键词：3nlFNa，3删，三倍体鱼