三种芽孢杆菌vip3a基因和特异bt株上清液毒性成分研究.pdfVIP

南开大学硕士研究生毕业(学位)论文 摘要 摘要 虽然以苏云金芽孢杆菌(Bt)为主的生物农药的相关研究有了很大的发展， 但是在Bt的应用过程中仍有许多问题需要解决。如目前仍有一些全球性重 要农业害虫对已发现的杀虫晶体蛋白仍不敏感，如鳞翅目的甜菜夜蛾，小 地老虎等。另外，害虫对广泛使用的ICPs产生了抗性，对单个Cry蛋白 的抗性还会引起害虫对与之同源的杀虫蛋白的交叉抗性。存在于发酵上清 液中的营养杀虫蛋白(Vip)是一类全新的杀虫物质，与Cry蛋白没有任 何同源性。对于解决上述问题有着非常重要的意义。 本文以本室多年来筛选保留，具有重要特异性的Bl以及有代表性的腊状芽 孢杆菌(Bc)和球形芽孢杆菌(Bs)菌株为试材，利用PCR方法检测了30株Bt， 19株显示有特异扩增带，咖甜基因菌株阳性率63％，远远高于以往文献报道值 同种属中分布的知识是很有意义的；检测Bs菌株共4株，没有菌株显示有特异 扩增带。通过对高效特异株15A3和9816C菌株及其质粒消除株的基因检测， 初步认定vip3A基因定位于质粒上。 同，推测其可能至少含有三种潜在的新vip3A类基因。其克隆、测序工作正在进 行。 对含有vip3A基因菌株的发酵上清液对棉铃虫和甜菜夜蛾进行了生物测定， 发现半数以上菌株的上清至少对一种供试昆虫有活性。利用SDS—PAGE技术分 析了部分杀虫活性较好菌株上清液的蛋白组成，发现vip3A基因阳性株基本都含 有约88．5KD蛋白带。通过热敏试验，以及对上清中卵磷酯酶C和溶血素的检测 排除了毒力因子是其他活性物质的可能。通过比较15A3和9816C菌株及其质 粒消除株发酵上清液的杀虫活性以及SDS．PAGE图谱，确认上清液中主要的杀 虫物质就是Vip3A蛋白。 关键词：苏云金芽孢杆菌，腊状芽孢杆菌，球形芽孢杆菌，Vip3A蛋白，新vip3A 基因，发酵上清液杀虫活性 南开太举硕士研究生毕业(学位)论文 摘簧 Abstract the based on biopesticides Bt have Although mostly productsdeveloped still are ofwhichIsthatsome successfully，theremanyproblems，one pests suchas and are toICPs ipsilon insensitivethat Agrotis Spodopteraex姆ua havebeenfound，In of has addition．the population croppestsdeveloped resistancetoICPs-dedved insome sprays，sincesinglegene insects species havefurnished toseveraI cross-resistancerelatedB．t．toxins．NoveI