三角褐指藻生物学特性比较研究和转基因初步探索.pdfVIP

三角褐指藻生物学特性比较研究及转基因初步探索 三角褐指藻生物学特性比较研究 及转基因初步探索 摘 要 三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum )是一种海洋真核单细胞硅藻，是海洋生态系统中 一种非常重要的初级生产者。三角褐指藻总脂含量很高，是一种很有潜力的能源微藻。三角 褐指藻来源广泛，形态多样，不同生境来源的藻株其生长状态和生理特性不尽相同，即使将 其培养在相同的环境中，生长状态和生理特性也会存在差异。三角褐指藻富含多种有价值的 不饱和脂肪酸，通过基因工程的手段可以进一步提高它们的含量。Δ6-去饱和酶是脂肪酸合成 过程中的关建酶。本论文以三角褐指藻为研究对象，对不同藻株的形态特征及生物学特性进 行了比较研究，并对其中一株藻进行了转基因的初步探索，转基因的对象是Δ6-去饱和酶基因。 本实验由两部分组成。 第一部分: 10株不同来源三角褐指藻生物学特性的比较研究。对选取的10株藻进行了形态 学和分子鉴定，并绘制了它们的生长曲线，测定了它们的生长速率和总脂含量。结果表明： 10株藻在显微镜下都呈梭形或卵圆形，黄褐色，将rbcL序列进行对比，这10株藻的rbcL序列 几乎完全相同，它们的生长曲线、生长速率和总脂含量有所差异，有些藻株之间的差异显著。 第二部分: 三角褐指藻转基因系统的初步研究。首先，从三角褐指藻中克隆得到Δ6脂肪 酸去饱和酶基因，在酿酒酵母真核表达体系中对其功能进行验证。结果显示，该基因所编码 的蛋白质能够将AA和ALA分别转化为GLA和SDA，说明克隆得到的基因即为 Δ6-脂肪酸去饱 和酶基因；然后成功构建了表达质粒pPhaD6 ，并用基因枪法将其转入三角褐指藻，获得了转 基因藻株已进行扩大培养，为进一步研究 Δ6-脂肪酸去饱和酶基因的功能及转基因藻株的生 物学特性奠定了基础。 本文研究了不同来源三角褐指藻的生物学特性，通过真核表达体系验证了 Δ6-脂肪酸去 饱和酶基因的功能，并对该藻的转基因体系进行了初步探索，该结果为微藻转基因研究提供 一定的理论依据。 关键词：三角褐指藻；不同来源；生物学特性；真核表达；转基因体系 I 三角褐指藻生物学特性比较研究及转基因初步探索 Comparative study of characteristics of Phaeodactylum tricornutum and the preliminary exploration of genetically modified system Abstract Phaeodactylum tricornutum is a marine eukaryotic unicellular algae , a kind of very important primary producers of the marine ecological system. In addition, Phaeodactylum tricornutum with a high content of fatty acid, is a potential raw material for biodiesel.Therefore, Phaeodactylum tricornutum is often used as a scientific research material. Phaeodactylum tricornutum have different sources and forms, different ecological environments produce different effects. Phaeodactylum tricornutum are rich in unsaturat