5.实验操作前准备.pptVIP

溶剂处理 溶剂相溶性 溶剂的 UV-截止波长 流动相准备 灌注 HPLC 系统 灌注 HPLC 系统 灌注HPLC 系统 灌注 HPLC 系统 灌注 HPLC 系统 灌注 HPLC 系统 灌注HPLC 系统 灌注 HPLC 系统 灌注 HPLC系统 灌注HPLC 系统 灌注 HPLC系统 样品准备 样品准备 色谱柱保存 色谱柱安装 色谱柱安装 色谱柱安装（续） 色谱柱平衡 色谱柱测试 色谱柱维护 系统校验 系统校验 （续） 小结 课后思考题 实验操作前的准备 溶剂特性 (技术指标) 纯度 黏度 折光指数 沸点 毒性 UV透明/UV-截止 溶解性 名称 乙酸 丙酮 乙腈 苯 丁醇 四氯化碳 氯仿 环己烷 环戊烷 二氯乙烷 二氯甲烷 二甲基甲酰胺 二甲亚砜 二氧六环 乙酸乙酯 乙醇 乙醚 庚烷 己烷 甲醇 甲乙酮 I-辛烷 戊烷 I-丙醇 四氯乙烷 四氢呋喃 甲苯 丁醇 I-丙醇 二丙醚 三氯乙烷 乙酸 丙酮 乙腈 苯 四氯化碳 氯仿 环戊烷 环己烷 二氯乙烷 二氯甲烷 二甲基甲酰胺 二甲亚砜 二氧六环 乙酸乙酯 乙醇 乙醚 庚烷 己烷 甲醇 甲乙酮 I-辛烷 戊烷 四氯乙烷 四氢呋喃 甲苯 水 二甲苯 三氯乙烷 水r 二甲苯 二丙醚 不相溶 相溶 异丙醇是一种理想的过度溶剂 溶剂 UV 截止 (nm) 乙腈 190 水 190 环己烷 195 己烷 200 甲醇l 210 乙醇 210 乙醚 220 二氯甲烷 220 氯仿 240 四氯化碳 265 四氢呋喃 280 (220) 甲苯 285 UV 截止是用1 cm比色池，以空气为参比测定时吸光度为1的波长。 主要步骤 量取每种溶剂的适当体积 混合溶剂 流动相过滤 流动相脱气 废液管 特氟隆- 憎水性膜，耐溶剂、酸和碱. 该滤膜一般用于非水样品. pH范围 114. 醋酸纤维素- 水相生物样品的良好滤膜，蛋白质保留性能弱. pH范围 4-8. 聚偏二氯乙烯- 耐大部分溶剂, 与蛋白质结合力弱. pH 2-12. 超滤膜- 用于生物样品的分子量截止滤膜. 尼龙 - 亲水性膜，过滤水和以水为溶剂的样品, 121oC自动分解, pH 范围 3-12, 不能用浓酸 硝化纤维素- 有高的蛋白质保留性能. 固相萃取 最基本的要求 - 过滤样品 将样品溶解在流动相或比流动相弱的溶剂中 进样体积应尽可能小 样品溶解在流动相中 样品溶解在较强的溶剂中 避免对色谱柱施加任何物理应力 柱两端封好避免溶剂挥发干 用适当的溶剂彻底冲洗后再保存 记录色谱柱的使用历史 每根色谱柱均标明了流动相的流动方向! 流动方向是用箭头或文字标示的. 不要改变此流动方向, 否则会降低色谱柱性能. 需要什么: 正确的接头以防止任何泄漏. 保护柱以保护分析柱 正确的工具 实用提示: 用手拧紧 再用扳手拧1/4圈(指的是钢 制接头） 用流动相平衡 避免对色谱柱的压力冲击. 反相色谱需要5-10倍柱体积的流动相进行平衡. 保证结果的重现性. 新的色谱柱应当附带性能测试结果（合格证），使用前应该测试一下性能 ! 使用后选择合适的溶剂冲洗色谱柱，将柱中保留作用很强的样品组分彻底冲洗出去. 不要用100% 的水保存色谱柱，否则会生长细菌并堵塞色谱柱. 如果想保持色谱柱性能，就不要打开柱两端的封头，也不要重新装填固定相. 在最佳流速条件下使用色谱柱 - 避免高流速. 不要在高温下长时间使用硅胶或键合相色谱柱. 控制流动相的pH 在色谱柱适合的范围. 系统校验的准备工作: 用流动相灌注了HPLC 系统. 平衡色谱柱. 检测器基线稳定. 无泄漏. 系统准备好进样 Test design: 调出所要使用的方法文件开始测试标液. 将所得结果与前期结果相比. 结果若正常，则说明系统性能良好，可以使用. 准备流动相 灌注 HPLC 系统 安装色谱柱 启动检测器 (对于UV检测器至少预热 20 分钟) 平衡色谱柱 准备样品 记录检测器响应 - 基线稳定 用标液进行系统校验 将结果与前期结果比较 记录结果 (作为对照) 如果有任何故障/出错，就记录下来 如果系统校验合格, 您就可进行样品分析 1. 您在进行一个分析时，发现基线周期性地波动. 压力读数上下波动。问题的原因是什么? 您如何解决此问题? 2. 您决定用实验室的仪器进行反相色谱分析. 前一个仪器操作者未告诉您他使用了什么溶剂. 您将水置于溶剂通道A并启动 了