4.免疫斑点试验.pptVIP

* 免疫酶斑点试验 Dot-ELISA 实验目的 2.了解免疫酶斑点技术的用途。 1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法； 免疫斑点酶技术的原理 硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜均具有很强的静电吸附力, 在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。 将免疫物质吸附于纤维素膜后，可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色。 包被未知抗原 NC 酶标抗体 底物 直接法Dot-ELISA 包被抗原 NC 待检抗体 酶标抗体 底物 间接法Dot-ELISA 免疫酶斑点技术的特点 1）特异性强，假阳性较少； 2）敏感性高，NC膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯， 检出抗原的敏感性较常规ELISA法高6～8倍；3）试剂用量少，比ELISA法至少节约10倍；4）检测结果可长期保存，便于复查。  1. 小组为单位 实验方法及注意事项 2. 膜片、抗原、洗涤液、吸水纸在实验台上 3. 酶标抗体放置在冰箱，使用前取出 4. 底物临用前配置 5. 震荡器全班一台, 调整好频率后不要乱动 方法 (直接法) 1. 取硝酸纤维素膜片, 用笔做好标记方便加样; 2. 将稀释的抗原液2-5μl加于相应格内,室温自然干燥! 3. 将膜片放入封闭液中震荡封闭15分钟; 4. 用洗涤液震荡洗涤3次, 每次1分钟, 吸干; 5. 将膜片放入稀释好的酶标抗体液体中，震荡15分钟, 吸干; 6. 将膜片放入洗涤液中, 震荡涤洗3次×1分钟, 吸干; 7. 将膜片放入底物液中, 震荡15分钟左右观察。 明显棕色斑点者为阳性 实验结果 *