百合中含糖量测定.doc

百合中含糖量的测定 一、实验材料：兰州百合 二、试剂配置： 80 % 的乙醇：用95 % 的乙醇配置； 30 %的HCl,：用36 %的浓HCl,配置； 蒽酮试剂：150 mg蒽酮溶于100 ml 稀硫酸 (76 ml 浓硫酸加入到30 ml 水中)； 0.1% 的间苯二酚：0.1 g间苯二酚溶于100 ml 95 %的乙醇； 2 mol/L NaOH：8 g NaOH溶于100ml水中； 氯化钙-醋酸溶液：250 g氯化钙加蒸馏水500 ml溶解，静置过夜，用醋酸调整pH到2.0～2.2； DNS：185 g酒石酸钾钠，溶于500 ml水中，加热至45℃，向酒石酸钾钠中加入6.3 g 3,5-二硝基水杨酸，在加入2 mol/L 的NaOH 262 ml后，再加入5 g苯酚和5 g亚硫酸钠，溶解后定容至1000 ml，并在4℃保存； 测标准曲线的葡萄糖、蔗糖和果糖配置浓度为1mg/ml。 三、实验步骤 1、提取 取2 g 百合，溶解在4 ml 80 % 的乙醇中研磨，再用2 ml 80 % 的乙醇涮洗研钵，将液体全部转移到离心管中，75℃加热10 min，5000转离心10 min，收集上清。沉淀加80 % 的乙醇4 ml重复抽提两次，合并上清液后，用80 % 的乙醇定容至25 ml。 2、可溶性总糖含量测定 向试管中加入3 ml蒽酮试剂，再加入100 μl乙醇提取液， 90℃保温15 min ，冷却后于620nm处测吸光值。含量以μg·g-1鲜重表示。用20-100 μg 的葡萄糖同法测定，作标准曲线（体系中加入20μl-100μl葡萄糖，再用乙醇补足剩余体积）。 试管号 0 1 2 3 4 5 试样 葡萄糖(ul) 0 10 20 30 40 50 50 乙醇（ul） 100 90 80 70 60 50 50 蒽酮（ml） 3 3 3 3 3 3 3 3、蔗糖含量测定 取200 μl乙醇提取液，加入400 μl 2 mol/L NaOH，100℃煮5 min，冷却后加入4 ml 30 %的HCl,1200 μl 0.1 % 的间苯二酚， 80℃保温10 min，冷却后于480nm处测吸光值。蔗糖含量以μg·g-1 鲜重表示。用40-200 μg 的蔗糖同法作标准曲线（体系中加入40μl-200μl蔗糖，再用乙醇补足剩余体积）。 试管号 0 1 2 3 4 5 试样 蔗糖（ul） 0 40 80 120 160 200 200 乙醇（ul） 200 160 120 80 40 0 0 NaOH（ul） 400 400 400 400 400 400 400 HCl (ml) 4 4 4 4 4 4 4 间苯二酚（ul） 1200 1200 1200 1200 1200 1200 1200 4、果糖含量测定 取400 μl乙醇提取液，加入800 ul 0.1 % 的间苯二酚和2800μl 30 %的HCl ， 80℃保温10 min，冷却后于480nm处测吸光值。果糖含量以μg·g-1 鲜重表示。用40-200 μg 的果糖同法作标准曲线（体系中加入40μl-200μl果糖，再用乙醇补足剩余体积）。 试管号 0 1 2 3 4 5 试样 果糖（ul） 0 40 80 120 160 200 400 乙醇（ul） 400 360 320 280 240 200 0 间苯二酚（ul） 800 800 800 800 800 800 800 HCl (ul) 1200 1200 1200 1200 1200 1200 1200 5、还原糖含量测定 取2 ml乙醇提取液，加入4mlDNS后，在沸水中加热2min, 冷却后于54nm处测吸光值。还原糖糖含量以μg·g-1 鲜重表示。用200-1000 μg 的葡萄糖同法作标准曲线（体系中加入200μl-1000μl果糖，再用乙醇补足剩余体积）。 试管号 0 1 2 3 4 5 试样 葡萄糖（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 2 乙醇（ml） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0 DNS（ml） 4 4 4 4 4 4 4 6、淀粉含量测定 （1）淀粉工作曲线的制作： 准确称取可溶性淀粉0.0000，0.1000，0.2000，0.3000，0.4000，0.5000，0.6000g于150ml三角瓶中，各加氯化钙-醋酸溶液30ml，于80℃水浴中水解10分钟，取出冷却后将溶液移入100ml容量瓶中，用蒸馏水定溶，测定旋光度，以旋光度为纵坐标，可溶性淀粉的质量为横坐标作图，绘制标准曲线或计算回归方程。 （2）样品测定: 称取5g鲜样烘干研细放置于150ml三角瓶中，加氯化钙-醋酸溶液30ml于沸水浴中水解10分钟，取出冷却后用蒸馏水定溶到