荔枝霜疫霉病病原菌鉴定和生物学特性研究.docVIP

荔枝霜疫霉病病原菌鉴定及生物学特性研究 荔枝霜疫霉病(Peronophythora Litchi Chen et al.)是目前荔枝生产上的重要病害之一[1~2]，严重影响荔枝品质、产量以及鲜果的贮运和外销。发病初期果皮表面出现褐色或黑色的不规则病斑，后来迅速扩展蔓延至全果变黑，果肉腐烂，有酸味和酒味，并流出褐色汁液，病害发生至中后期，病部表面长出白色霜霉状物。叶片受害后出现褪绿斑块，以后病斑扩大成为不规则的黄绿色斑块；空气湿度大时，病部会长出白色霜霉状物[3]。该病在广东、广西、福建、海南、台湾均有发生，不仅严重危害接近成熟的果实，也危害嫩梢、叶片、花穗、结果小枝、果柄及幼果，引起大量落花、落果、裂果和烂果，产量损失可达30%～80%[4~5]。本文对荔枝霜疫霉病原菌的生物学特性的研究为有效地防治病害、降低产量损失等提供理论依据。 材料和方法 1.1 病原来源 从海南省澄迈县永发镇采集荔枝霜疫霉病病果，组织分离获得菌株，进行单孢分离纯化菌种并将纯化后的菌种保存在PDA斜面上待用。 1.2 病原菌致病性测定 无菌条件下，将菌饼接种到健康无病的荔枝叶片，保湿24 h，设接种清水为对照，重复3次。 1.3 病原菌的分离鉴定及培养性状 27 ℃下在PDA平板上对病菌纯化培养，对 病原菌生物学特性测定 1.4.1 温度对菌丝生长的影响 将菌饼移至PDA平板中央，分别置于5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、27 ℃、30 ℃和35 ℃共8个梯度的恒温培养箱中培养4 d和7 d后，测量菌落的直径。每处理3个平板，重复3次（下同）。 1.4.2 p 用1 mol/L的HCl和NaOH调节PDA培养基的pH值，使之分别为3、4、5、6、7、8、9、10、11和12共10个梯度。将菌饼移至pH梯度培养基平板中央，27 ℃的恒温箱中培养4 d和7 d后，测量菌落的直径。 1.4.3 碳源对菌丝生长的影响 用等量的蔗糖、麦芽糖、乳糖、山梨醇、甘露醇、D-果糖、D-半乳糖、可溶性淀粉、甘油和L-阿拉伯糖共10种碳源分别与PDA培养基中的葡萄糖等量置换，配制成不同碳源的培养基，将菌饼接种在培养基平板中央，置27 ℃的恒温箱中，培养4 d和7 d后，测量菌落的直径。 1.4.4 氮源对菌丝生长的影响 用等量的甘氨酸、酵母浸膏、L-组氨酸、草氨酸、硝酸铵、硫酸铵、氯化铵、牛肉浸膏、蛋白胨和尿素共10种氮源分别与Czapek培养基中硝酸钠等量置换，配成不同氮源的培养基。将菌饼移至培养基平板中央，置于27 ℃的恒温箱中，培养4 d和7 d后，测量菌落的直径。 1.4.5 光照对菌丝生长的影响 将菌饼移至PDA平板中央，置于完全黑暗、12 h光暗交替和完全光照3个处理条件下，于27 ℃恒温培养箱中培养4 d和7 d后，测量菌落的直径。 1.4.6 致死温度和时间的测定 于45 ℃、50 ℃、55 ℃、60 ℃、恒温水浴锅中的试管内加入1 ml孢子悬浮液，处理5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min 2 结果和分析 2.1 致病性测定结果 通过对致病性测定观察可见，在健康的荔枝果上产生了明显的病原菌菌丝，取其病原菌在显微镜下观察，发现病原菌与原分离培养的荔枝霜疫霉菌菌落、孢囊梗、孢子囊相同，根据柯氏法则，确定了该病菌对荔枝的致病性。如图1 图1 荔枝霜疫霉菌病原菌接种健康果和叶产生的病症 2.2 病原菌的分离鉴定及培养性状 菌落形态：PDA平板上菌落突起，高1～2mm，菌丝絮状，白色质密，边缘整齐（如图2）。 病原菌形态：孢囊梗直立，双分叉锐角分枝，前端逐渐变细；孢子囊柠檬形、椭圆形，无色至淡褐色，顶端有明显的乳突，可直接萌发或间接萌发，直接萌发产生芽管，间接萌发产生游动孢子，一个孢子囊可产生5～14个游动孢子，多为6～8个；游动孢子肾脏形，侧生双鞭毛。根据观测得到的病原菌形态特征，查阅有关文献后，可初步确定此菌为荔枝霜疫霉菌[6~7]。 菌落形态 孢囊梗及孢子囊 图2 荔枝霜疫霉病菌 2.3温度对菌丝生长的影响 菌丝在10～30℃范围内均可生长，适宜温度为20～30 ℃，最适温度为27 ℃，10～15 ℃菌丝生长缓慢，5 ℃和35 图3 温度对荔枝霜疫霉菌丝生长的影响 Fig.3 Effect of temperature on mycelial growth of peronophythoraceae litchi 2.4 PH对菌丝生长的影响 菌丝在pH 3~12均能生长，适宜pH为4~8，最适pH为6，pH大于8时，对菌丝生长有抑制作用，说明酸性条件适合菌丝生长（见图4） 图4 pH对荔枝霜疫霉菌丝生长的影响