疟原虫检测血涂片镜检法送审稿-国家卫生计生委.doc

ICS 点击此处添加中国标准文献分类号 ws 中华人民共和国卫生行业标准 XX/T XXXXX—XXXX 疟原虫检测 血涂片镜检法 Microscopic examination of blood films for malaria parasites 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （本稿完成日期：2016年5月） XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由提出。 本标准起草单位： 本标准主要起草人： 疟原虫检测 血涂片镜检法????? 范围 本标准规定了疟原虫血涂片的制作、固定与溶血、染色和显微镜检测。 本标准适用于各级医疗机构和疾病预防控制机构对疟原虫的显微镜检测。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 Microscopy for the detection, identification and quantification of malaria parasites on stained thick and thin blood films in research settings. WHO，TDR, 2015. 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 疟原虫Plasmodium 疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核生物，是疟疾（malaria）的病原体。寄生于人体的疟原虫主要有恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、间日疟原虫（Plasmodium vivax）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale）等。 血涂片 blood films 将血液涂制于载玻片上制成的涂片。供显微镜检查疟原虫的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片两种。 镜检法 microscopic examination 指采用光学显微镜检查疟原虫的方法。将待检血涂片在显微镜下进行形态学观察和判断。 仪器和器材 光学显微镜（100×油浸物镜、5×-10×目镜） 计数器 载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片） 推片 pH测量计 血片染色架 血片干燥架 玻片盒 染色盘和染色缸 试剂和材料 吉氏染色原液（Giemsa) pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS） 甲醇（分析纯） 香柏油或专用浸油（折射率≥1.5） 二甲苯（分析纯） 蒸馏水 75%酒精 消毒棉签 一次性采血针 一次性手套 擦镜纸 检测步骤 血涂片的制作 采血部位及取血方法 经75%乙醇消毒采血部位。待干后，用一次性采血针在耳垂或指端扎刺取血，婴儿可从拇趾或足跟扎刺取血。取一张已消毒推片，用拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片左下角刮取血液4μl-5μl用于制作厚血膜，再用该端中部刮取血液 1μl-1.5μl用于制作薄血膜。 厚血膜制作 取一张载玻片，将推片左下角的血滴涂于载玻片的中央偏右，由里向外划圈涂成直径0.8cm-1.0cm的圆形厚血膜，厚度以一个油镜视野内可见到5个-10个白细胞为宜。 用干棉球抹净推片左下角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两张玻片保持25°-35°角，迅速向前推成舌状薄血膜。 编号 用铅笔在侧。 薄血膜固定 将薄血膜一端朝下呈45°角，用棉签蘸取甲醇溶液，均匀轻抹于薄血膜表面，避免碰触厚血膜。 厚血膜溶血 在干燥的厚血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟，待血膜呈浅灰色，倾去溶血液。厚血膜一天内染色无需溶血，超过一天或成批染色的应溶血。 吉氏染色 吉氏染液的配制（参见附录B） 吉氏染液包括吉氏染液原液和吉氏染液工作液。吉氏染液原液由5g吉氏粉加250ml甘油充分研磨后加入250ml甲醇配制。吉氏染液原液在避光条件下可长期保存。常用的吉氏染液工作液包括2%，3%和10%浓度三种，分别由吉氏染液原液和pH 7.2磷酸盐缓冲液（PBS）按比例配制。吉氏染液工作液只能使用时新鲜配制。 单张血涂片染色（参见附录C） 单张血涂片吉氏染色常用于临床疟疾患者的显微镜疟原虫检测。采用3%吉氏染液的常规染色方法血涂片染色质量较好，可长期保存，但染色时间较长（约30min）。采用10%吉氏染液的快速染色方法染色时间较短（约8-10min），但血涂片不适合长期保存。 成批血涂片染色（参见附录C） 成批血涂片吉氏染色常用于人群流行病学调查中的显微镜疟原虫检测，常采用2%吉氏染液