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反胶束萃取技术在蛋白质分离和酶固定化上的应用和发展 The application and development of Reversed micelle technology in protein separation and enzyme immobilization 2011年10月6日  反胶束萃取技术在蛋白质分离和酶固定化上的应用和发展 摘 要：反胶束是表面活性剂在有机溶剂中自发形成的与正常胶束结构相反的纳米尺度的一种聚合体。反胶束可用于蛋白质的分离、酶的固定化等生物上的物质的分离，是一种新型的生物分离技术，本文就该技术的原理、方法、在以上物质分离上的应用及其最新研究进展进行介绍。 关键词：反胶束； 萃取； 蛋白质分离； 酶固定化 The application and development of reversed micelle technology in protein separation and enzyme immobilization Abstract: Reversed micelle is surfactants in organic solvents spontaneously formed with normal glue beam structure of the opposite of a kind of nanometer scale polymers. Reverse micelle can be used for protein separation, such as enzyme immobilization of the separation of biological material, a new type of biological separation technology, this paper the principle and method of this technology in the application of more substances separation, and the latest research on progress into introduction. Keywords: reversed micelle; extraction ; protein separation; enzyme immobilization 1 引言 传统的液-液萃取分离技术成本低，易于操作，已广泛用于多组分物质的分离。但由于缺乏具有良好选择性的生化溶剂，采用该技术难以分离蛋白质、核酸的生物活性物质。而反胶束萃取技术的发展，为解决萃取生物活性物质这一问题提供了可靠的方法。七十年代，Wells等首次提出反胶束中的酶蛋白能具有活性，并在一定PH值和离子强度等条件下，反胶束可用于提取酶蛋白。二十世纪八十年代，生物化学家对反胶束萃取蛋白质的原理及工艺条件作了深入研究。反胶束萃取技术因具有成本低，溶剂可重复利用，萃取率高，条件温和，不会引起蛋白质和酶变性的优点，到20世纪90年代成为生物工程的热门技术[1]。另一方面，反胶束酶系统在生物反应中的催化作用研究也取得较大进，在反胶束酶系统中酶的定位和结构、酶的动力学特征、催化活性和稳定性等方面的基础理论研究，为进一步拓宽反胶束技术的应用领域打下良好基础。近年来，此技术又有了许多发展，如设计新表面活性剂和添加亲和性配基、反胶团乳化液膜萃取、用反离子表面活性剂反萃取胶团中酶蛋白及设计新的萃取设备等，解决了传统方法中遇到的酶失活、萃取选择性差等问题，从而大大促进其工业应用的发展。 1.1反胶束相关理论 反胶束（或反胶团）是表面活性剂在非极性有机溶剂中超过临界胶团浓度时自发形成的热力学稳定、光学透明的球状或圆柱状聚集体[2]。表面活性剂的疏水的非极性尾部指向有机溶剂，亲水的极性头部指向聚集体内部形成一个纳米级大小的极性腔。此极性腔容纳一定量的水，其内部接近细胞内环境，不仅能溶解亲水性分子如氨基酸、多肽和蛋白质等，而且能保持它们的活性。 1.2反胶束技术及萃取原理 反胶束（或逆胶束）是表面活性剂分散于连续有机相中自发形成的与正常胶束结构相反的纳米尺度的一种含水聚合体。常用于形成反胶束的表面活性剂有“Aerosol OT”(简称AOT)（磺基琥珀酸二辛酯钠盐），CTAB[3]。在反胶束中，组成反胶束的表面活性剂的极性基团朝内形成一个内表面，与平衡离子和水一起构成一个极性核心，称为“水池”，极性分子可溶于这个水池中。蛋白质就是被溶解于“水池”中而被分离萃取，酶也可以被固定在反胶束的“水池中”进行催化作用。 表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界胶束浓度时，便形成聚集体，称为正常胶束。表面活性剂溶于有机溶剂，当其浓度