试验四温和噬菌体诱导和噬菌斑观察.pdfVIP

实验四 温和噬菌体诱导和噬菌斑观察 一、教学目标及基本要求 1. 了解温和噬菌体的性质，学习溶源菌的检查方法。 2. 掌握噬菌体效价测定方法 3. 了解噬菌斑的形成过程。 二、实验原理 温和噬菌体侵染宿主细胞后将其基因组整合到宿主细胞的染色体组中， 使宿主细菌成为溶源性细菌。溶源性细菌一般在生长繁殖过程中可自发 的发生极低频率的裂解，释放出具有感染力的噬菌体。可以用物理或化 学的方法诱导，使其大部分或全部裂解。检测时需要有对此温和噬菌体 敏感的宿主细胞，即溶源性细菌释放的噬菌体对于该细胞而言是烈性噬 菌体，该细胞被称为敏感株。敏感株可以从待检的溶源株相近的种或变 种中找到。 实验中选用携带λ/d λ噬菌体的大肠杆菌，称为双重溶源性菌株。该菌株 同时被λ完整噬菌体和λ缺陷噬菌体(d λ)侵染。该菌株一般用于高频转 导，两种噬菌体中只有完整的λ噬菌体才能在侵染敏感株后于固体平板 上形成噬菌斑。每毫升噬菌体裂解液中所含的噬菌体数量被称为噬菌体 效价，一般以每毫升噬菌体裂解液在含有敏感菌的固体平板上形成的噬 菌斑的数量来表示。裂解量则是表示一个细胞被裂解后所释放出的噬菌 体数量，可以根据每毫升裂解的溶源性菌株数量和效价进行计算。 三、实验材料 1. 菌种：带有噬菌体λ和缺陷噬菌体( λdgal+) 的双重溶源菌E.coli K1