NaCl胁迫下玉米幼苗叶片中几个microRNA的real—time PCR 鉴定上的毕业论文.docxVIP

NaCl胁迫下玉米幼苗叶片中几个microRNA的real—time PCR 鉴定上的毕业论文目录目录1摘要4关键词4ABSTRACT5Key Words51.绪论61.1盐害对植物的影响61.1.1 盐害简介61.1.2 盐害对玉米的影响61.1.3 其它因素对受盐胁迫玉米的影响61.1.3.1 NO对盐胁迫的缓解作用61.1.3.2 丛枝菌根对盐胁迫的缓解作用71.1.3.3 脱落酸对盐胁迫防御作用71.1.3.4 外源Ca2+对盐胁迫的缓解作用71.1.3.5 铈（Ce）对受盐胁迫玉米的作用71.1.3.6 硅对盐胁迫下玉米幼苗生长的影响71.2 实时定量PCR的原理81.2.1 生物原理81.2.2 化学原理81.2.2.1荧光染料嵌入法81.2.3实时定量PCR的重要概念91.3 micro RNA简介91.3.1 micro RNA概述91.3.2 植物的microRNA101.3.3 miRNA的特征与差异111.3.4 鉴定miRNA的方法111.3.5 几种热门的microRNA 介绍121.3.5.1 mir-21的研究121.3.5.2 Let-7的研究121.3.6 MiRNA与植物逆境胁迫的研究进展131.4 microRNA种类间存在协同作用关系141.5 与microRNA研究密切相关的学科或研究方向141.6选题目的及意义151.7 实验流程152.实验内容162.1 材料与仪器162.1.1 实验材料、试剂、器皿及资料162.1.2 实验仪器162.2实验方法162.2.1营养液的配制162.2.2玉米种子的处理及萌发172.2.3玉米幼苗的移栽172.2.4玉米幼苗的处理172.2.5 总RNA的提取172.2.5.1 CTAB-LiCl法提取总RNA172.2.5.2 SDS法提取总RNA182.2.5.3 TRNzol-A+法提取总RNA192.2.6 MiRNA定量PCR的引物设计192.2.7 MiRNA的cDNA的合成192.2.8 Real Time PCR 反应212.2.9待检验miRNA的引物设计212.2.10荧光定量标准曲线的制定212.2.11 内参的选择222.3实验结果232.3.1总RNA提取结果232.3.2 5个待检测MiRNA的realtime PCR结果282.3.3 相对表达量的柱状图结果302.4 实验数据处理与结果分析382.4.1 trizol法提取的总RNA的OD值分析及讨论382.4.2 trizol法提取的总RNA的电泳结果分析及讨论382.4.3 实时定量PCR结果分析及讨论382.4.4 相对表达量的柱状图分析38参考文献40附录1 缩略词41附录二 realtime CT值41致谢42NaCl胁迫下玉米幼苗叶片中几个microRNA的Real-time PCR鉴定作者：谢玺（西北农林科技大学生命科学学院）指导教师：武永军摘要：microRNAs(miRNAs)是一类长度为20-25nt的非编码内源小分子RNA，广泛存在于各种生物中。它由基因组特定区域编码，抑制靶基因翻译。在线虫、植物和哺乳动物中的研究发现其功能多种多样。盐渍化土壤在我国分布广、面积大，已成为一种严重的环境问题和制约粮食生产的主要因素之一。盐渍化主要发生我国西部和北部地区，而玉米则是北方主要作物之一，故研究盐胁迫对玉米的影响是十分有必要的。本实验以玉米幼苗叶片为材料，通过NaCl胁迫的方式处理玉米并提取总RNA，对前期已经预测到的5个新的 miRNAs进行了Real time PCR验证。设置3h、6h两个时间梯度和5%、10%、20%三个浓度梯度。利用real-time PCR的数据做出相对表达量的柱状图并分析，做出推断。关键词：玉米；盐胁迫；miRNA；Real time PCRIdentification of several miRNAs in leaves of maize seedlings using real-time PCR under NaCl stressAuthor:Xi Xie Tutor:Yongjun WuABSTRACT：microRNAs(miRNAs) are a kind of noncoding endogenous RNAs and they distributewidely in nematode, plant, mammal and other organisms. They were coded by the special region of genome, matured by Dicer and other relevant enzyme. They bindwith RISC and guide compl