植酸酶phyA基因在解脂耶氏酵母po1h中的表达.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, May 25; 26(5): 610−615 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2010 CJB, All rights reserved. 工业生物技术 植酸酶phyA 基因在解脂耶氏酵母po1h 中的表达 1 2 1 2 陈云 ，邹由 ，王一丁 ，马立新 1 四川师范大学生命科学学院，成都 610101 2 湖北大学生命科学学院，武汉 430062 摘 要: 本实验通过 PCR 方法从毕赤酵母 GS115-phyA 中扩增出不含有信号肽及内含子的黑曲霉 NRRL3135 植酸酶 phyA 基因，并将其克隆到表达载体 pINA1297 中，得到表达载体pINA1297-phyA ，利用醋酸锂转化法将线性化载体转 化到解脂耶氏酵母po1h 中，通过YNBcasa 和PPB 平板筛选出阳性表达菌株，阳性菌株在YM 培养基中28 ℃培养 6 d 后酶活达到最大为 636.23 U/mL 。表达上清经SDS分析得到表达植酸酶分子量约为 130 kDa，但通过去糖基化处 理后其分子量变为51 kDa ，与理论值相符。经过酶学性质分析表明重组植酸酶最适pH 为5.5 ，最适温度为55 ℃，该酶 在pH 2.0~8.0 处理 1 h 后仍有较高酶活，并且90 ℃处理 10 min 后还有 86.08 ％的残留酶活，其抵抗胃蛋白酶和胰蛋白 酶能力也较强。 关键词: 黑曲霉，植酸酶，phyA 基因，解脂耶氏酵母 po1h Expression of phytase gene phyA in Yarrowia lipolytica po1h 1 2 1 2 Yun Chen , You Zou , Yiding Wang , and Lixin Ma 1 College of Life Science, Sichuan Normal University, Chengdu 610101, China 2 College of Life Science, Hubei University, Wuhan 430062, China Abstract: Using the polymmerse chain reaction (PCR), we amplified the phytase gene phyA from Pichia pastoris GS115-phyA in Aspergillus niger NRRL3135 without the signal peptide sequence and intron sequence,. Then, it was cloned into pINA1297 vector to generate a recombinant vector of pINA1297-phyA . pINA1297-phyA was linearized and transformed into Yarrowia lipolytica po1h by the lithium acetate method. The positive transformants were obtained by YNBcasa and PPB plates, after induced in YM medium at 28°C for 6 day. The activity of the expressed phytase phyA reached 636.23 U/mL. The molecular weight of the